Question

【題目】病毒介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)移是現(xiàn)在基因治療研究的最新方向，美、法等國(guó)成功采用腺病毒載體進(jìn)行心、腦、肺、肝內(nèi)膽管和肌肉組織的體內(nèi)基因轉(zhuǎn)移．其具體思路如圖所示：

回答下列問(wèn)題：
（1）如果要在短時(shí)間內(nèi)獲得較多的目的基因，通常采用技術(shù)，在操作步驟中包括兩次升溫和一次降溫，其中降溫的目的是 ．
（2）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)需要用到的工具酶有 ．
（3）作為接受轉(zhuǎn)移基因的體細(xì)胞應(yīng)具有的特點(diǎn)是（寫(xiě)出一點(diǎn)即可）．在進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，當(dāng)細(xì)胞貼滿瓶壁時(shí)需用酶處理，使之分散成單個(gè)細(xì)胞，培養(yǎng)液中還需通人無(wú)菌氣體，其中通入CO2的目的主要是 ．
（4）如果檢測(cè)發(fā)現(xiàn)目的基因被成功導(dǎo)入了受體細(xì)胞，但卻沒(méi)有檢測(cè)到目的基因相對(duì)應(yīng)的蛋白質(zhì)，應(yīng)考慮位于目的基因首端的和末端的是否設(shè)計(jì)好，并從這方面進(jìn)一步改善．

Answer 1

【答案】
（1）PCR；使引物和模板鏈結(jié)合
（2）限制酶和DNA連接酶
（3）具有增殖優(yōu)勢(shì)（生命周期長(zhǎng)，能存活幾月至幾年，最后可延續(xù)至病人的整個(gè)生命期；必須比較堅(jiān)固，足以耐受處理）；胰蛋白；維持培養(yǎng)液的PH
（4）啟動(dòng)子；終止子
【解析】解：（1）如果要在短時(shí)間內(nèi)獲得較多的目的基因，通常采用PCR技術(shù)，第一次升溫是使雙鏈解開(kāi)，即高溫解鏈；降溫的目的是使引物和模板鏈結(jié)合，即低溫復(fù)性；第二次升溫是使DNA復(fù)制開(kāi)始進(jìn)行．（2）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)需要用到的工具酶有限制酶和DNA連接酶．（3）作為接受轉(zhuǎn)移基因的體細(xì)胞應(yīng)具有的特點(diǎn)是 具有增殖優(yōu)勢(shì)；生命周期長(zhǎng)，能存活幾月至幾年，最后可延續(xù)至病人的整個(gè)生命期；必須比較堅(jiān)固，足以耐受處理等．在進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，當(dāng)細(xì)胞貼滿瓶壁時(shí)需用胰蛋白酶處理，使之分散成單個(gè)細(xì)胞，培養(yǎng)液中還需通人無(wú)菌氣體，其中通入CO2的目的主要是維持培養(yǎng)液的PH．（4）基因表達(dá)載體包括啟動(dòng)子、終止子、目的基因和標(biāo)記基因，啟動(dòng)子位于目的基因的首端，啟動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄，終止子位于目的基因的末端，終止轉(zhuǎn)錄過(guò)程．
所以答案是：（1）PCR 使引物和模板鏈結(jié)合（2）限制酶和DNA連接酶（3）具有增殖優(yōu)勢(shì)（生命周期長(zhǎng)，能存活幾月至幾年，最后可延續(xù)至病人的整個(gè)生命期；必須比較堅(jiān)固，足以耐受處理） 胰蛋白 維持培養(yǎng)液的PH（4）啟動(dòng)子 終止子
【考點(diǎn)精析】解答此題的關(guān)鍵在于理解基因工程的原理及技術(shù)的相關(guān)知識(shí)，掌握基因工程的原理是利用DNA重組技術(shù)．