Question

【題目】如圖是從土壤中篩選分解尿素細(xì)菌的過程，請回答下列問題

（1）圖中選擇培養(yǎng)基應(yīng)以_____為唯一氮源；鑒別培養(yǎng)基還需添加______作指示劑，分解尿素細(xì)菌在該培養(yǎng)基上生長一段時間后，其菌落周圍的指示劑將變成______色。土壤中的細(xì)菌之所以能將尿素分解，是因為這些細(xì)菌能合成_______。

（2）制備實驗所需的培養(yǎng)基時，在各成分都溶化后和分裝前，要進(jìn)行的是__________和滅菌，對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌的常用方法是_____________。倒平板時要待平板冷凝后，將平板倒置，其主要目的是___________。

（3）在5個細(xì)菌培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋倍數(shù)為105的土壤樣品溶液0.1ml，培養(yǎng)一段時間后，平板上長出的細(xì)菌菌落數(shù)分別為191、16、326、173和182。該過程采取的接種方法是_____________，每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)量為_______個/ml；此計數(shù)方法測得的數(shù)目往往比活菌的實際數(shù)目_____，理由是：______________。在統(tǒng)計數(shù)目時，除了用上述方法進(jìn)行菌落計數(shù)外，___________________也是測定微生物數(shù)量的常用方法。

Answer 1

【答案】尿素 酚紅 紅 脲酶 調(diào)整pH 高壓蒸汽滅菌 防止培養(yǎng)皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基造成污染 稀釋涂布平板法 1.82×108 少 兩個或更多個細(xì)胞連在一起，平板上觀察到的只是一個菌落 顯微鏡直接計數(shù)

【解析】

1、培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理：培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源．缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物。

2、鑒定分解尿素的細(xì)菌：細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)。在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細(xì)菌，若指示劑變紅，可確定該種細(xì)菌能夠產(chǎn)生脲酶，并分解尿素。

3、微生物常見的接種的方法

①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落。

②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落。

4、統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法

（1）顯微鏡直接計數(shù)法

①原理：利用特定細(xì)菌計數(shù)板或血細(xì)胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物數(shù)量；②方法：用計數(shù)板計數(shù)； ③缺點：不能區(qū)分死菌與活菌。

（2）間接計數(shù)法（活菌計數(shù)法）

①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌．通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。

②操作

a、設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實驗的說服力與準(zhǔn)確性。

b、為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計數(shù)。

③計算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=（c÷V）×M，其中c代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（mL），M代表稀釋倍數(shù)．。

（1）圖中選擇培養(yǎng)基應(yīng)以尿素為唯一氮源；鑒別培養(yǎng)基還需添加酚紅作指示劑，分解尿素細(xì)菌在該培養(yǎng)基上生長一段時間后，其菌落周圍的指示劑將變成紅色。土壤中的細(xì)菌能合成的脲酶，將尿素分解成氨之后，才能被植物利用。

（2）制備實驗所需的培養(yǎng)基時，在各成分都溶化后和分裝前，要進(jìn)行的是調(diào)整pH和滅菌，培養(yǎng)基用高壓蒸汽進(jìn)行滅菌．倒平板時防止培養(yǎng)皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基造成污染，因此要待平板冷凝后，將平板倒置。

（3）用于計數(shù)細(xì)菌菌落數(shù)的常用方法是稀釋涂布平板法，統(tǒng)計的菌落數(shù)應(yīng)介于30～300之間，故選擇細(xì)菌菌落數(shù)為191、173和182的平板計數(shù)。所以每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)量=（191+173+182）÷3÷0.1×105=1.82×108個。由于兩個或多個細(xì)菌連接在一起時，往往統(tǒng)計的是一個菌落，所以用此計數(shù)方法測得的細(xì)菌數(shù)較少。測定微生物數(shù)量常用的方法有稀釋涂布平板計數(shù)和血細(xì)胞計數(shù)板顯微鏡直接計數(shù)。