Question

【題目】人外周血單核細(xì)胞能合成白細(xì)胞介素2（IL－2）。該蛋白可增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，但在體內(nèi)易 被降解。研究人員將1L－2基因與人血清白蛋白（HAS）基因拼接成一個(gè)融合基因，并在酵母菌中表達(dá)，獲得具有1L－2生理功能、且不易降解的1L－2－HSA融合蛋白，其技術(shù)流程如圖。請(qǐng)回答：

（1）圖中③過程的模板是_______。表達(dá)載體1中的位點(diǎn)________應(yīng)為限制酶Bg1Ⅱ的識(shí)別位點(diǎn)，才能成功構(gòu)建表達(dá)載體2。

（2）表達(dá)載體2導(dǎo)入酵母菌后，融合基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA中，與1L－2蛋白對(duì)應(yīng)的堿基序列不能含有____________，才能成功表達(dá)出IL－2－HSA融合蛋白。 啟動(dòng)子是__________識(shí)別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA。

（3）培養(yǎng)人外周血單核細(xì)胞時(shí)，需要將溫度控制在___________℃，此外還需要通入__________（氣體）。

（4）應(yīng)用_____________技術(shù)可檢測(cè)酵母菌是否表達(dá)出IL－2－HSA融合蛋白。

（5）如果基因表達(dá)載體2導(dǎo)入的是優(yōu)質(zhì)奶牛的受精卵細(xì)胞，經(jīng)胚胎培養(yǎng)后移入受體母牛子宮內(nèi)可以存活的生理學(xué)基礎(chǔ)是 ________________。

Answer 1

【答案】 IL-2的cDNA a 終止密碼子 RNA聚合酶 37 無菌的95%空氣和5%CO2 抗原抗體雜交 母牛子宮對(duì)外來胚胎基本上不發(fā)生免

【解析】據(jù)圖分析，①表示轉(zhuǎn)錄提取信使RNA，②表示逆轉(zhuǎn)錄形成目的基因，③表示PCR擴(kuò)增技術(shù)。（1）PCR技術(shù)擴(kuò)增的原理是DNA復(fù)制原理，所以該過程的模板與其產(chǎn)物相同，即IL-2的cDNA。根據(jù)目的基因IL-2cDNA的兩端的酶切位點(diǎn)分別是EcoRⅠ和BglⅡ，所以表達(dá)載體1也必須有這兩個(gè)酶切位點(diǎn)，表達(dá)載體1上已有EcoRⅠ，推測(cè)位點(diǎn)a應(yīng)含有BglⅡ。（2）融合基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA中與1L－2蛋白對(duì)應(yīng)的堿基序列不能含有終止密碼子，才能成功表達(dá)出IL－2－HSA融合蛋白，否則HAS不能合成。啟動(dòng)子是RNA聚合酶的識(shí)別并結(jié)合的部位。（3）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)所需要的條件是：95%空氣和5%CO2氣體環(huán)境、適宜溫度（37℃）和PH、無毒無菌的環(huán)境及合適的營養(yǎng)成分，其培養(yǎng)基中通常需加入血清、血漿等一些天然成分。（4）檢測(cè)蛋白質(zhì)常常用抗原—抗體雜交技術(shù)。（5）胚胎培養(yǎng)后移入受體母牛子宮內(nèi)可以存活的生理學(xué)基礎(chǔ)是發(fā)情期母牛子宮對(duì)外來胚胎基本上不發(fā)生避免排異反應(yīng)反應(yīng)。