Question

【題目】下圖1表示含目的基因的DNA片段，圖2表示質粒（巳知PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ三種限制酶切割后產生的黏性末端都不相同）。請回答下列問題：

（1）已知DNA的合成方向總是從子鏈的5＇端向3＇端延伸。利用PCR技術以圖1中的DNA片段為模板擴增目的基因，需要的引物有______________(從A、B、C、D四種單鏈DNA片段中選擇）。上述過程中，經過__________次循環(huán)后會產生雙鏈等長的目的基因片段。

（2）要保證目的基因能與圖2中的質粒連接，要將（2）中選出的兩種引物的5＇端分別添加上________兩種限制酶的識別序列。在此基礎上，對擴增的目的基因和質粒都用這兩種限制酶處理，待基因表達載體構建完成后，加入到含大腸桿菌的轉化液中。要從中分離出含該重組質粒的大腸桿菌單菌落，請簡述操作思路將轉化液接種在__________的固體培養(yǎng)基上，在適宜條件下培養(yǎng)一段時間后，___________。

（3）從DNA分子結構分析，上述操作用到的工具酶作用的共同點是______________。

Answer 1

【答案】 B、C 3 PstⅠ、EcoRⅠ 加入四環(huán)素 觀察是否有菌落生長 都作用于磷酸二酯鍵，（但不作用氫鍵）

【解析】DNA是由反向平行的兩條鏈構成，子鏈合時，由子鏈的5＇端向3＇端延伸，要想使目的基因與質粒結合，目的基因的兩端加上與質粒一樣的限制酶序列。

（1）已知DNA的合成方向總是從子鏈的5＇端向3＇端延伸，由圖1可知子鏈的5＇對應的引物分別是B、C。

由圖可知第三輪復制會產生雙鏈等長的目的基因片段。

（2）圖2中有三種限制酶切點，其中PstⅠ、EcoRⅠ切割抗青霉素基因，HindⅢ切割的是抗四環(huán)素基因，為了保證重組質粒至少有一個標記基因，所以在兩種引物的5＇端分別添加上選擇PstⅠ、EcoRⅠ這兩種限制酶識別的序列，重組質粒中含有四環(huán)素抗性基因，所以在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上篩選重組大腸桿菌，觀察是否有菌落生長。

（3）基因工程中用到的是限制酶和DNA連接酶，這兩種酶作用的化學鍵都是磷酸二酯鍵。