Question

【題目】CAR-T細(xì)胞療法是通過設(shè)計(jì)CAR基因，并導(dǎo)入癌癥患者的T細(xì)胞中，使其轉(zhuǎn)化為CAR-T細(xì)胞，CAR-T細(xì)胞膜上的CAR蛋白與癌細(xì)胞表面抗原特異結(jié)合后，激活CAR-T細(xì)胞使其增殖、分化，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)癌細(xì)胞的特異性殺傷和記憶，主要過程如下圖。請(qǐng)回答：

（1）要獲取CAR基因，可采取PCR技術(shù)進(jìn)行大量擴(kuò)增，其原理是___________________。

（2）將CAR基因?qū)�入患�?/span>T細(xì)胞前，需完成過程①，該過程所需要的酶有__________，連接形成pCDH—CAR上除了目的基因外，還有一些必須的部分，比如__________，它可使轉(zhuǎn)錄在需要的地方停止下來。

（3）完成過程②的常用方法是__________法，受體細(xì)胞是__________。

（4）檢測CAR-T細(xì)胞能夠產(chǎn)生CAR蛋白所采取的方法是__________。

（5）構(gòu)建好的CAR-T細(xì)胞還需要再體外進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增時(shí)需要定期更換培養(yǎng)液，這樣做的目的是______________________________。

Answer 1

【答案】DNA雙鏈的復(fù)制 限制性內(nèi)切酶和DNA連接酶 終止子 顯微注射法 患者的T細(xì)胞 抗原—抗體分子雜交 清除代謝產(chǎn)物，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成傷害

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）PCR技術(shù)又叫DNA的體外擴(kuò)增技術(shù)，其原理是DNA雙鏈的復(fù)制。

（2）過程①表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建，該過程需要限制性內(nèi)切酶和DNA連接酶，連接形成基因表達(dá)載體pCDH—CAR上除了目的基因外，還有啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因等，其中終止子可使轉(zhuǎn)錄在需要的地方停止下來。

（3）過程②表示導(dǎo)入受體細(xì)胞，由圖可知，其受體細(xì)胞是患者的T細(xì)胞，導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞常用方法是顯微注射法。

（4）檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)所采取的方法是抗原—抗體分子雜交。

（5）構(gòu)建好的CAR-T細(xì)胞擴(kuò)增時(shí)需要定期更換培養(yǎng)液，這樣做的目的是清除代謝產(chǎn)物，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成傷害。