Question

【題目】與抗生素相比，抗菌肽具有抑菌范圍廣且不易產生耐藥性等優(yōu)勢，廣泛用于養(yǎng)殖業(yè)。

將若干分子的石蛙抗菌肽（SPC）編碼序列按照首尾相連的方式插在質粒pCLY10的卡那霉素抗性基因內部，形成長度為5200 bp的重組質粒pCLY10-nSPC（圖15）。若pCLY10-nSPC經限制酶AccIII處理后產生75 bp和4600 bp兩種長度的DNA片段，則單個SPC由_____________個氨基酸構成；每個重組質粒含有_____________個SPC編碼序列。

（1）根據題干信息判斷，用于導入pCLY10-nSPC的受體細胞類型應為_____________。

A. 抗菌肽敏感、卡那霉素抗性

B. 抗菌肽抗性、卡那霉素抗性

C. 抗菌肽敏感、卡那霉素敏感

D. 抗菌肽抗性、卡那霉素敏感

（2）若選定的受體細胞因缺乏trpA基因不能利用無機氮源合成色氨酸，則應采用兩步法篩選含重組質粒的細胞，其中用于第一步篩選的固體培養(yǎng)基配方應為_____________。

A. 葡萄糖、硫酸銨、生長因子

B. 牛肉膏、酵母粉、NH4Cl、卡那霉素

C. 蛋白胨（包括所有氨基酸）、酵母粉、牛肉膏

D. 葡萄糖、蛋白胨（包括所有氨基酸）、生長因子、卡那霉素

（3）在測試表達產物SPC對枯草芽孢桿菌的殺菌功效時獲得了如圖所示的結果，下列表述中最能解釋這一實驗結果的是_____________和_____________。

A. SPC的濃度與抑菌效果有顯著相關性

B. 圓紙片的直徑與清晰區(qū)的大小呈正相關

C. 培養(yǎng)基中瓊脂的含量影響清晰區(qū)的大小

D. SPC對枯草芽孢桿菌的年齡具有不同的效應

Answer 1

【答案】25 9 D A A D

【解析】

基因工程的操作步驟：獲取目的基因（基因文庫、PCR、人工合成）；構建基因表達載體（含標記基因、啟動子、終止子、目的基因、復制原點等）；把目的基因導入受體細胞（顯微注射法、農桿菌轉化法、基因槍法、花粉管通道法、鈣離子處理法）；目的基因的檢測和鑒定（分子水平和個體水平檢測，前者包括DNA分子雜交、分子雜交和抗原抗體雜交；后者如抗蟲抗病接種實驗）。

由題意可知，該重組質粒pCLY10-nSPC長度為5200 bp，每個SPC編碼序列內部均有1個AccIII酶切位點，若pCLY10-nSPC經限制酶AccIII處理后產生75 bp和4600 bp兩種長度的DNA片段，說明單個SPC編碼序列長度為75bp，SPC中含有的氨基酸的數目為：75÷3=25個；長度為75bp的序列數目為：（5200-4600）÷75=8，又因為AccIII的酶切位點位于SPC編碼序列內部，故4600 bp長度的DNA片段中仍含有1個SPC編碼序列，故該重組質粒含有的SPC編碼序列的數目為8+1=9個。

（1）由圖可知，構建重組質粒時，目的基因插入會破壞卡那霉素抗性基因，故受體細胞中也不能含有卡那霉素抗性基因，即對卡那霉素應該是敏感的；又因為重組質粒中含有抗菌肽基因，可以表達抗菌肽，故受體細胞應該對抗菌肽具有抗性。故選D。

（2）若選定的受體細胞因缺乏trpA基因不能利用無機氮源合成色氨酸，而重組質粒含有trpA基因，只有含有重組質粒或質粒的受體細胞才能在不含有機氮源的培養(yǎng)基上存活，故首先可以選擇不含有機氮源的培養(yǎng)基進行初步篩選。

A、葡萄糖、硫酸銨、生長因子不含有機氮源，A正確；

B、牛肉膏可以提供有機氮源，B錯誤；

C、蛋白胨、牛肉膏均可以提供有機氮源，C錯誤；

D、蛋白胨可以提供有機氮源，D錯誤。

故選A。

（3）由圖可知，在測試表達產物SPC對枯草芽孢桿菌的殺菌功效時，浸有不同濃度SPC的圓紙片產生的透明圈大小不同，說明SPC的濃度與抑菌效果有顯著相關性；另外隨著培養(yǎng)時間的延長，透明圈逐漸變小，SPC對枯草芽孢桿菌的年齡具有不同的效應。故選AD。