Question

【題目】胰島素是治療糖尿病的重要激素，利用大腸桿菌合成的人胰島素是第一種基因工程藥物�；卮鹣铝袉栴}：

（1）首先應從人的______細胞中提取mRNA，通過反轉(zhuǎn)錄法獲得cDNA，在______酶的作用下形成重組質(zhì)粒，再導入經(jīng)過______處理的大腸桿菌。

（2）不能直接提取人胰島素基因?qū)�入大腸桿菌生產(chǎn)胰島素，從基因結(jié)構(gòu)分析，主要原因是______。

（3）為大規(guī)模培養(yǎng)目的菌株，需要從cDNA文庫中獲取目的基因。先把大腸桿菌涂平板，再將得到的菌落“復印”到薄膜上。薄膜上的細菌原位溶菌，再將其DNA變性，與放射性同位素標記的人胰島素基因雜交，洗去未結(jié)合的過剩探針。應挑選圖中的菌落______（填“Ⅰ”或“Ⅱ”）進行大規(guī)模培養(yǎng)。這種檢測方法稱為______技術(shù)。

（4）一些制藥公司用轉(zhuǎn)基因的酵母菌來生產(chǎn)人胰島素，雖然產(chǎn)量略低，但活性比轉(zhuǎn)基因大腸桿菌生產(chǎn)的高，原因主要是______。

Answer 1

【答案】胰島B 限制酶和DNA連接酶 Ca+ 直接提取人胰島素基因中復制原點、無表達所需的啟動子、終止子 Ⅱ DNA分子雜交 酵母菌具有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，可生產(chǎn)出具有生物活性的胰島素

【解析】

要檢測轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因，這是目的基因能否在真核細胞中穩(wěn)定遺傳的關鍵。檢測的方法是采用DNA分子雜交技術(shù)，即將轉(zhuǎn)基因生物的基因組DNA提取出來，在含有目的基因的DNA片段上用放射性同位素作標記，以此作為探針，使探針與基因組DNA雜交，如果顯示出雜交帶，就表明目的基因已插入染色體DNA中。

（1）首先應從人的胰島B細胞中提取mRNA，通過反轉(zhuǎn)錄法獲得cDNA，在限制酶和DNA連接酶的作用下形成重組質(zhì)粒，再導入經(jīng)過Ca+處理的大腸桿菌。

（2）基因工程中，不能將胰島素合成基因直接導入大腸桿菌，胰島素合成基因是真核細胞具有的基因，而大腸桿菌屬于原核細胞，胰島素合成基因在大腸桿菌細胞中不能穩(wěn)定遺傳和表達，直接提取人胰島素基因中復制原點、無表達所需的啟動子、終止子。

（3）由圖可知：用DNA分子雜交技術(shù)在菌落Ⅱ出現(xiàn)了雜交帶，故應挑選圖中的菌落Ⅱ進行大規(guī)模培養(yǎng)。

（4）基因的表達包括基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯，胰島素合成基因在大腸桿菌細胞內(nèi)表達時，遺傳信息的傳遞方向是DNA→（m）RNA→蛋白質(zhì)。經(jīng)檢測，胰島素合成基因的表達產(chǎn)物未能達到預期的生物活性，導致這種差異的原因可能是表達產(chǎn)物未經(jīng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體的加工，而酵母菌具有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，可生產(chǎn)出具有生物活性的胰島素。