Question

如圖1所示，若用兩種識別切割序列完全不同的限制酶E和F從基因組DNA上切下目的基因，并將之取代質(zhì)粒pZHZ1（3.7kb，1kb=1000對堿基）上相應(yīng)的E-F區(qū)域 （0.2kb），
（1）那么所形成的重組質(zhì)粒pZHZ2

 

．
A．既能被E也能被F切開        B．能被E但不能被F切開
C．既不能被E也不能被F切開    D．能被F但不能被E切開

（2）已知在質(zhì)粒pZHZl中，限制酶G切割位點(diǎn)距限制酶E切割位點(diǎn)0.8kb，限制酶H切割位點(diǎn)距限制酶F切割位點(diǎn)O．5kb．若分別用限制酶G和H酶切兩份重組質(zhì)粒pZHZ2樣品，據(jù)上表所列酶切結(jié)果判斷目的基因的大小為

 

kb；并將目的基因內(nèi)部的限制酶G和H切割位點(diǎn)標(biāo)注在圖2中．
（3）若想在山羊的乳汁中收獲上述目的基因的表達(dá)產(chǎn)物，則需將重組質(zhì)粒pZHZ2導(dǎo)入至山羊的

 

細(xì)胞中．若pZHZ2進(jìn)入細(xì)胞后插入在一條染色體DNA上，那么獲得轉(zhuǎn)基因純合子山羊的方式是

 

．
（4）上述目的基因模板鏈中的．TGA序列對應(yīng)一個密碼子，翻譯時識別該密碼子的tRNA上相應(yīng)的堿基序列是

 

．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的應(yīng)用

專題：

分析：據(jù)圖1分析，限制酶具有專一性，只能識別特定的DNA序列，并在特定的位點(diǎn)切割磷酸二酯鍵形成DNA片段，獲取目的基因和質(zhì)粒時切割位點(diǎn)是E和F，重組質(zhì)粒上含有限制酶E和F的切割位點(diǎn)，所以既能被E也能被F切開．

解答： 解：（1）用限制酶從基因組DNA上切下目的基因，并取代質(zhì)粒pZHZ1（3.7kb，1kb=1000對堿基）上相應(yīng)的E-F區(qū)域 （0.2kb），用DNA連接酶連接后形成重組質(zhì)粒，則在重組質(zhì)粒中仍然含有限制酶E和限制酶F的切割位點(diǎn)，形成的重組質(zhì)粒pZHZ2既能被E也能被F切開，故A正確．
（2）根據(jù)題中信息，原來質(zhì)粒長度為3.7kb，切去EF（0.2kb）之后還有3.5kb，插入目的基因后形成重組質(zhì)粒，重組質(zhì)粒的長度為1.6+3.1=1.2+3.5=4.7kb，進(jìn)而可推導(dǎo)出目的基因長度為4.7-3.5=1.2kb．重組質(zhì)粒中G的切割位點(diǎn)距E的切割位點(diǎn)0.8kb，單獨(dú)用限制酶G切割后產(chǎn)生1.6kb和3.1kb兩種片段，說明在重組質(zhì)粒中除了圖中標(biāo)示出來的G酶切位點(diǎn)外，還有一個G酶切位點(diǎn)；H的酶切位點(diǎn)距F0.5kb，用H單獨(dú)酶切后產(chǎn)生1.2kb和3.5kb兩種片段，說明在重組質(zhì)粒中除了圖中標(biāo)示出來的H酶切位點(diǎn)外，還有一個H酶切位點(diǎn)；根據(jù)題中信息提示“將目的基因內(nèi)部的限制酶G和H切割位點(diǎn)標(biāo)注在圖中”，可確定在EF之間分別含有一個G和H的酶切位點(diǎn)，進(jìn)而可斷定G的識別位點(diǎn)，在距E點(diǎn)右側(cè)0.8kb處，H的識別位點(diǎn)在距F左側(cè)0.7kb處．
（3）將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞中，通常以受精卵作為受體細(xì)胞，當(dāng)受精卵發(fā)育成山羊后，在雌性山羊的乳汁中可以提取到目的基因的表達(dá)產(chǎn)物．重組質(zhì)粒插入在一條染色體DNA上，可通過雌雄轉(zhuǎn)基因山羊雜交的方法來獲取轉(zhuǎn)基因純合子山羊．
（4）根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則，目的基因的模板鏈中堿基為TGA，則mRNA中對應(yīng)的密碼子為ACU，tRNA中的反密碼子為UGA．
故答案為：
（1）A
（2）1.2    

（3）受精卵  轉(zhuǎn)基因山羊間相互交配    
（4）UGA

點(diǎn)評：本題綜合考查基因工程的相關(guān)內(nèi)容，涉及到基因工程常用工具酶的切割位點(diǎn)的確定、根據(jù)限制酶切割結(jié)果推斷目的基因的長度、基因工程中常用的受體細(xì)胞、密碼子反密碼子的推導(dǎo)等問題，綜合性強(qiáng)，有一定難度．