Question

【題目】肺細(xì)胞中的let-7基因表達(dá)減弱，癌基因RAS表達(dá)增強(qiáng)，會引發(fā)肺癌．研究人員利用基因工程技術(shù)將let-7基因?qū)�入肺癌�?xì)胞實(shí)現(xiàn)表達(dá)，發(fā)現(xiàn)肺癌細(xì)胞的增殖受到抑制,該基因工程技術(shù)基本流程如圖1,研究發(fā)現(xiàn)let-7基因能影響癌基因RAS的表達(dá)，其影響機(jī)理如圖2,請回答下列問題：

（1）進(jìn)行圖1過程①時，需用______酶切開載體以插入let-7基因．載體應(yīng)有RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，以驅(qū)動let-7基因轉(zhuǎn)錄，該部位稱為_____________．

（2）圖1中重組載體導(dǎo)入肺癌細(xì)胞的常用方法是_____________

（3）根據(jù)圖2分析，可從細(xì)胞中提取______進(jìn)行分子雜交，以直接檢測let-7基因是否轉(zhuǎn)錄．肺癌細(xì)胞增殖受到抑制，可能是由于細(xì)胞中______含量減少引起的，其實(shí)質(zhì)是遺傳信息表達(dá)時______過程受阻，導(dǎo)致RAS基因沉默．

Answer 1

【答案】

（1）限制性核酸內(nèi)切（或限制） 啟動子

（2）顯微注射法

（3）let-7基因的RNA （miRNA） RAS蛋白 翻譯

【解析】

（1）過程①表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建，在該過程中需要用限制性核酸內(nèi)切酶（簡稱限制酶）對載體進(jìn)行切割，以便于目的基因的插入；啟動子是一段特殊的DNA序列，是RNA聚合酶識別和結(jié)合的位點(diǎn)，RNA聚合酶結(jié)合到該位點(diǎn)，可驅(qū)動轉(zhuǎn)錄過程．

（2）目的基因?qū)�入動物�?xì)胞中一般采用顯微注射法．如果肺癌細(xì)胞中導(dǎo)入重組載體，則肺癌細(xì)胞的增殖將受到影響，因此可以通過對細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)觀察細(xì)胞增殖的速率，并與正常肺癌細(xì)胞的增殖速率進(jìn)行比較得出相應(yīng)結(jié)論．

（3）判斷目的基因是否在受體細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄，可用分子雜交技術(shù)來檢測，從細(xì)胞中提取mRNA和用放射性同位素或者熒光標(biāo)記的目的基因單鏈DNA片段進(jìn)行雜交．根據(jù)題中信息“肺細(xì)胞中的let-7基因表達(dá)減弱，癌基因RAS表達(dá)增強(qiáng)，會引發(fā)肺癌”知，導(dǎo)入let-7基因后，肺癌細(xì)胞的增殖受到抑制；據(jù)圖2可知，let-7基因影響RAS基因表達(dá)的機(jī)理是：let-7基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物miRNA與RAS基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物RAS mRNA結(jié)合，使RAS基因翻譯受到抑制，引起細(xì)胞中的RAS蛋白含量減少，進(jìn)而導(dǎo)致癌細(xì)胞增殖受到抑制．