Question

【題目】為解決塑料袋（化學(xué)成分為聚乙烯）造成的白色污染，某研究小組試圖從土壤中尋找一種能加速塑料袋自然降解過(guò)程的目的菌，以下為該研究小組從土壤中尋找并篩選目的菌的流程，請(qǐng)回答問(wèn)題：

（1）對(duì)培養(yǎng)基滅菌常用的方法是________。在接種前需要檢測(cè)使用的培養(yǎng)基是否被污染，方法是________。

（2）圖中①表示對(duì)土壤懸浮液進(jìn)行一系列的________，目的是使聚集在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落。在實(shí)驗(yàn)中，研究者每隔24小時(shí)統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，并選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，這樣可以防止________。

（3）Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基（按功能分），其作用是使目的菌能“脫穎而出”，如圖采用的接種方法為________。

（4）假設(shè)該同學(xué)發(fā)現(xiàn)Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基上菌落數(shù)目過(guò)多連成一片，說(shuō)出一種可能的原因并提出合理的處理措施。

原因________________；措施：________________。

Answer 1

【答案】高壓蒸汽滅菌法 將未接種的培養(yǎng)基在適宜溫度的恒溫箱中倒置培養(yǎng)一段時(shí)間（或1～2 d），觀察是否有菌落生成 梯度稀釋 因培養(yǎng)時(shí)間不足導(dǎo)致遺漏細(xì)菌數(shù)目 選擇 稀釋涂布平板法 菌液濃度過(guò)高（或稀釋倍數(shù)不夠） 可以通過(guò)增大稀釋倍數(shù)解決

【解析】

1、無(wú)菌操作技術(shù)有消毒和滅菌，消毒有煮沸消毒法、巴氏消毒法和化學(xué)藥劑消毒法，滅菌有灼燒滅菌法適用于接種工具、干熱滅菌法適用于玻璃器皿和金屬工具、高壓蒸汽滅菌法適用于培養(yǎng)基及容器的滅菌。
2、接種最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法，平板劃線分離法：由接種環(huán)以菌操作沾取少許待分離的材料，在無(wú)菌平板表面進(jìn)行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續(xù)劃線，微生物細(xì)胞數(shù)量將隨著劃線次數(shù)的增加而減少，并逐步分散開(kāi)來(lái)，如果劃線適宜的話，微生物能一一分散，經(jīng)培養(yǎng)后，可在平板表面得到單菌落。
稀釋平板計(jì)數(shù)是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的單個(gè)菌落，即是由一個(gè)單細(xì)胞繁殖而成這一培養(yǎng)特征設(shè)計(jì)的計(jì)數(shù)方法，即一個(gè)菌落代表一個(gè)單細(xì)胞。計(jì)數(shù)時(shí)，首先將待測(cè)樣品制成均勻的系列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細(xì)胞分散開(kāi)，使成單個(gè)細(xì)胞存在（否則一個(gè)菌落就不只是代表一個(gè)細(xì)胞），再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內(nèi)。

（1）培養(yǎng)基常采用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌。在接種前需要檢測(cè)使用的培養(yǎng)基是否被污染，可以將未接種的培養(yǎng)基在適宜溫度的恒溫箱中培養(yǎng)一段時(shí)間，觀察是否有菌落生成，若有菌落生成，則已經(jīng)被污染，否則沒(méi)有被污染。

（2）圖中①表示對(duì)土壤懸浮液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，目的是使聚集在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落。在實(shí)驗(yàn)中，研究者每隔24小時(shí)統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，并選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，這樣可以防止因培養(yǎng)時(shí)間不足導(dǎo)致遺漏細(xì)菌數(shù)目。

（3）要篩選能降解聚乙烯塑料的微生物，應(yīng)選擇以聚乙烯塑料為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基。圖Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基上采用的接種方法為稀釋涂布平板法。

（4）如果培養(yǎng)基上細(xì)菌數(shù)目過(guò)多連成一片，可能的原因是菌液濃度過(guò)高或操作過(guò)程不是無(wú)菌操作，還可能是接種時(shí)沒(méi)有把細(xì)菌分散開(kāi)，采取的措施有：可以通過(guò)增大稀釋倍數(shù)解決（或培養(yǎng)過(guò)程中被雜菌污染；嚴(yán)格無(wú)菌操作程序�；蚶�用接種針劃線時(shí)，劃下一個(gè)區(qū)域前沒(méi)有對(duì)接種針滅菌處理；每劃一個(gè)新的區(qū)域都要對(duì)接種針進(jìn)行滅菌處理）。