Question

【題目】科學家將魚抗凍蛋白基因轉入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相對寒冷的環(huán)境中生長。質(zhì)粒上有PstI、SmaI、HindIII、AIuI等四種限制性核酸內(nèi)切酶切割位點，下圖是轉基因抗凍番茄培育過程的示意圖（ampt為抗氨芐青霉素基因），其中①∽④是轉基因抗凍番茄培育過程中的相關步驟，I、II表示相關結構或細胞。請據(jù)圖作答：

（1）在構建重組DNA時，可用一種或多種限制性核酸內(nèi)切酶進行切割，為了避免目的基因和載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，在此實驗中應該選用限制性核酸內(nèi)切酶______________分別對魚抗凍蛋白基因和質(zhì)粒進行切割，切割后產(chǎn)生的DNA片段分別為__________、_________種。

（2）基因工程中核心步驟是_________（填序號）,該步驟的目的是_________________________。為了使目的基因正常表達，其首端必須有啟動子，它是___________識別和結合的部位。若限制酶切出了平末端，要選擇___________進行連接。（填“E·coliDNA連接酶”或“T4DNA連接酶”）

（3）圖中將魚抗凍蛋白基因?qū)�入番茄細胞的方法稱為____________________。它是利用運載體Ti質(zhì)粒中含有___________，可以將目的基因整合到宿主細胞的染色體上。

（4）檢測番茄植株細胞中魚抗凍蛋白基因是否成功表達，從分子水平常采用的方法是________。

Answer 1

【答案】 PstI、SmaI 4 2 ① 使目的基因穩(wěn)定存在并能遺傳下去，使目的基因表達及能發(fā)揮作用 RNA聚合酶 T4DNA連接酶 農(nóng)桿菌轉化法 TDNA 抗原—抗體雜交

【解析】試題分析：據(jù)圖分析，魚的抗凍蛋白基因（目的基因）上具有三種限制酶切割位點，PstⅠ酶的切割位點存在于目的基因的兩側，SmaⅠ酶的切割位點存在于目的基因的左側，而AluⅠ酶的切割位點存在于目的基因的中央，因此不宜選用AluⅠ酶；質(zhì)粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四種限制酶切割位點，因此應該選擇PstI、SmaI分別切割目的基因和質(zhì)粒；圖中①～④分別表示：基因表達載體的構建、目的基因?qū)�入受體細胞、脫分化、再分化。

（1）根據(jù)以上分析已知，在此實驗中應該選用限制性核酸內(nèi)切酶PstI、SmaI分別對魚抗凍蛋白基因和質(zhì)粒進行切割，切割后目的基因所在的DNA產(chǎn)生4個（種）DNA片段、質(zhì)粒產(chǎn)生2個（種）DNA片段。

（2）基因工程的核心步驟是基因表達載體的構建，即圖中的①步驟，目的是使目的基因穩(wěn)定存在并能遺傳下去，使目的基因表達及能發(fā)揮作用；基因表達載體中的啟動子是RNA聚合酶識別和結合的位點；T4DNA連接酶可以連接平末端。

（3）將目的基因?qū)�入番茄細胞等植物細胞常用農(nóng)桿菌轉化法，利用運載體Ti質(zhì)粒中含有T-DNA，可以將目的基因整合到宿主細胞的染色體上。

（4）番茄植株細胞中魚抗凍蛋白基因表達的產(chǎn)物是抗凍蛋白，可以利用抗原—抗體雜交技術進行檢測。