Question

【題目】苯酚及其衍生物廣泛存在于工業(yè)廢水中，對(duì)環(huán)境有嚴(yán)重危害．小明同學(xué)準(zhǔn)備依據(jù)圖1操作步驟，從處理廢水的活性污泥中分離篩選酚降解高效菌株。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）甲圖中苯酚降解菌的富集培養(yǎng)基應(yīng)含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中可作為碳源的有_____________________。

（2）將采集到的樣品接種培養(yǎng)，苯酚用量應(yīng)隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增加而逐漸________。以達(dá)到獲得苯酚高 效降解菌的目的。應(yīng)采用_____________ 方法來(lái)進(jìn)行該菌種的計(jì)數(shù)與分離，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活 菌的實(shí)際數(shù)目要_________________。

（3）制備平板培養(yǎng)基時(shí)除了需要水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽和特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外，還必須添加_____。培養(yǎng)基的滅菌方法為_____________________。

（4）乙圖為連續(xù)劃線法示意圖，在該圖中_____（填序號(hào)）區(qū)域最易獲得單菌落。如需要長(zhǎng)期保存該菌種，應(yīng)采用甘油管藏的方法，保存溫度為_____。

Answer 1

【答案】蛋白胨、苯酚 增加（升高） 稀釋涂布平板 低 瓊脂（凝固劑） 高壓蒸汽滅菌 ③ -20℃

【解析】

微生物培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽，此外還要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。對(duì)異養(yǎng)微生物來(lái)說(shuō)，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作為營(yíng)養(yǎng)要素成分時(shí)并不是起單一方面的作用。微生物常見(jiàn)的接種的方法有：①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種、劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開(kāi)始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落；②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過(guò)大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。

（1）培養(yǎng)基成分中的有機(jī)物均可以提供碳源，即蛋白胨、苯酚據(jù)可以作為碳源；

（2）分析實(shí)驗(yàn)可知，實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖呛Y選苯酚降解菌，因此將采集到的樣品接種培養(yǎng)，苯酚用量應(yīng)隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增加而逐漸增加，以達(dá)到富集苯酚降解菌的目的，圖甲中采用的是稀釋涂布平板法，以便于菌落計(jì)數(shù)與分離，用這種方法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目要小，因?yàn)槌３Ｓ袃蓚�(gè)或多個(gè)細(xì)菌連在一起生長(zhǎng)繁殖而形成一個(gè)菌落；

（3）制備平板培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基，除了需要水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽和特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)（生長(zhǎng)因子）外，還必須添加瓊脂作為凝固劑。培養(yǎng)基的滅菌方法為高壓蒸汽滅菌法；

（4）圖乙為平板劃線法，隨著劃線次數(shù)的增加，菌種進(jìn)一步被稀釋，因此圖中③區(qū)域更易獲得單菌落。長(zhǎng)期保存該菌種，應(yīng)采用甘油管藏的方法，保存溫度為-20℃。