Question

【題目】神經(jīng)纖毛蛋白-1（NRP-1）是血管內(nèi)皮生長因子的新型受體，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，與正常組織細(xì)胞相比，NRP-1在乳腺癌（MCF7）細(xì)胞中高表達(dá)，通過參與多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)來促進(jìn)腫瘤血管的生成，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤體積的增長。本研究將為 NRP-1 單克隆抗體靶向治療乳腺癌提供數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。

（1）取乳腺癌（MCF7）組織塊，運(yùn)用____________________技術(shù)獲得 MCF7 細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。用人的_____________________蛋白對(duì)小鼠進(jìn)行注射，使小鼠產(chǎn)生免疫反應(yīng)，制備雜交瘤細(xì)胞，將雜交瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)到多孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)，吸取培養(yǎng)孔中的________________（填上清液或沉淀細(xì)胞），應(yīng)用_________________技術(shù)進(jìn)行抗體陽性檢測(cè)。經(jīng)多次篩選和細(xì)胞培養(yǎng)，獲得 NRP-1 單克隆抗體（NRP-1 MAb）。

（2）將 MCF7 細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液，等量注入 4 組裸鼠（即無胸腺裸鼠）右前腋下，接種后 3 天開始給藥NRP-1 單克隆抗體（NRP-1 MAb），共給藥 7 次，對(duì)照組注射等量的生理鹽水。每隔 5 天測(cè)算一次腫瘤的體積，如下圖所示：

從上圖中可以看出_________________________

（3）結(jié)合題干信息，綜合以上研究請(qǐng)你推測(cè) NRP-1 MAb 抑制腫瘤的作用機(jī)理是_____________________。

（4）注射不同劑量 NRP-1 MAb 33 天后，剝離腫瘤組織稱重，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下圖：

從該結(jié)果中可以看出___________________________。綜合比較（3）和（5）的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可見中高劑量和低劑量的 NRP-1 MAb 在降低腫瘤體積和降低腫瘤重量上出現(xiàn)了不一致性。通過實(shí)驗(yàn)研究，有助于指導(dǎo)實(shí)踐中科學(xué)用藥。

Answer 1

【答案】動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) 神經(jīng)纖毛蛋白-1（NRP-1） 上清液 抗原—抗體雜交 NRP-1 MAb能夠有效地降低腫瘤的體積，中、高劑量抗體的降低效果比低劑量的效果更顯著 NRP-1在MCF7細(xì)胞中高表達(dá)，NRP-1 MAb與NRP-1特異性結(jié)合，阻斷了血管內(nèi)皮生長因子與NRP-1的結(jié)合，抑制了腫瘤血管生成，進(jìn)而降低了腫瘤的體積 NRP-1 MAb能夠有效地降低腫瘤組織的重量，中、高劑量抗體的降低效果稍微沒有低濃度的好，不同劑量降低效果的差異并不顯著

【解析】

單克隆抗體的制備過程是：對(duì)小動(dòng)物注射抗原，從該動(dòng)物的脾臟中獲取效應(yīng)B細(xì)胞，將效應(yīng)B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，篩選出能產(chǎn)生單一抗體的雜交瘤細(xì)胞，克隆化培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞（體內(nèi)培養(yǎng)和體外培養(yǎng)），最后獲取單克隆抗體。

（1）取乳腺癌組織塊，通過動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)獲得MCF7細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；用人的神經(jīng)纖毛蛋白對(duì)小鼠進(jìn)行注射使小鼠產(chǎn)生免疫反應(yīng)；抗體較輕，會(huì)留在上清液中，故要吸取培養(yǎng)孔中的上清液；應(yīng)用抗原-抗體雜交技術(shù)進(jìn)行抗體陽性檢測(cè)；

（2）根據(jù)題圖分析可知，經(jīng)過給藥NRP-1 MAb處理的腫瘤體積均小于對(duì)照組，說明NRP-1 MAb能夠有效地降低腫瘤組織的重量且中、高劑量抗體的降低效果比低劑量的效果更顯著；

（3）已知NRP-1在乳腺癌（MCF7）細(xì)胞中高表達(dá)，通過參與多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)來促進(jìn)腫瘤血管的生成，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤體積的增長，而NRP-1 單克隆抗體則可以和NRP-1特異性結(jié)合，故阻斷了血管內(nèi)皮生長因子與NRP-1的結(jié)合，抑制了腫瘤血管生成，進(jìn)而降低了腫瘤的體積；

（4）分析題圖可知，比較實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的腫瘤組織重量NRP-1 MAb能夠有效地降低腫瘤組織的重量，但中、高劑量抗體的降低效果稍微沒有低濃度的好，不同劑量降低效果的差異并不顯著。