Question

【題目】基因工程操作步驟中，需要從受體細(xì)胞群中篩選出已獲得目的基因的細(xì)胞，如圖中①﹣③示一種篩選方法的過程．pBR322質(zhì)粒含有兩個抗性基因，分別是Ampr（氨芐青霉素）抗性基因和Tetr（四環(huán)素）抗性基因，其中在Tetr抗性基因上有下列目的基因的插入位點（插入將導(dǎo)致Tetr抗性基因功能性失活），請回答：

（1）如圖中①過程所需的酶除DNA連接酶以外，需要的限制酶是_____．

（2）經(jīng)過①過程，pBR322質(zhì)�？赡艹霈F(xiàn)的兩種結(jié)果：A1是_____ A2是_____．

（3）經(jīng)過導(dǎo)入過程，B（受體細(xì)菌）可能出現(xiàn)結(jié)果是_____

A．導(dǎo)入未成功的細(xì)菌 B．含A1的細(xì)菌

C．含A2的細(xì)菌 D．含A1和A2的細(xì)菌

（4）②過程表示用含四環(huán)素（使細(xì)胞停止生長，但不致死）和環(huán)絲氨酸（使生長的細(xì)胞致死）的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)菌甲，則培養(yǎng)結(jié)果C表示在培養(yǎng)基中可能存活的細(xì)菌包括_____。

（5）若要進(jìn)一步篩選出符合要求的受體細(xì)胞D，則③過程需要做的處理是（請參照過程②的方法）_____。

Answer 1

【答案】EcoRVSal1 重組質(zhì)粒 沒有發(fā)生重組的質(zhì)粒 ABCD 導(dǎo)入不成功的細(xì)菌和導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的細(xì)菌 將存活的細(xì)菌轉(zhuǎn)移到含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)

【解析】

（1）①過程為構(gòu)建基因表達(dá)載體，需要對質(zhì)粒進(jìn)行切割和與目的基因相連接，所以要用限制酶和DNA連接酶；據(jù)圖分析可知，限制酶可選EcoRVSal1。
（2）①為構(gòu)建基因表達(dá)載體，會出現(xiàn)將目的基因與質(zhì)粒成功重組和重組失敗的結(jié)果，所以ρBR322會出現(xiàn)兩種結(jié)果，即：重組質(zhì)粒和未重組的質(zhì)粒。
（3）經(jīng)過導(dǎo)入過程，B（受體細(xì)菌）細(xì)菌有4類情況：含有不是重組的質(zhì)粒、含有重組質(zhì)粒的、不含有質(zhì)粒的、同時含有重組和不重組的質(zhì)粒，故選ABCD。
（4）細(xì)菌有三類：含有質(zhì)粒（不是重組的）、含有重組質(zhì)粒的、不含有質(zhì)粒的。Tet抗性基因上有目的基因的插入位點，所以重組質(zhì)粒上沒有Tet抗性基因，成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒的細(xì)菌和沒有導(dǎo)入的細(xì)菌均不含Tet抗性基因，即都不抗四環(huán)素，細(xì)胞可以在含四環(huán)素培養(yǎng)基上存活但不生長，而環(huán)絲氨酸會使生長的細(xì)胞致死，對不生長的細(xì)胞無影響，但會使含有抗四環(huán)素的細(xì)菌致死，所以C中成活的細(xì)菌有導(dǎo)入不成功的細(xì)菌和導(dǎo)入重組質(zhì)粒的細(xì)菌。
（5）經(jīng)過C后，現(xiàn)需要含重組質(zhì)粒的細(xì)菌，含重組質(zhì)粒的細(xì)菌含有Amp抗性基因，可在氨卡青霉素培養(yǎng)基中生長，而導(dǎo)入不成功的細(xì)菌會在其中死亡，所以可將經(jīng)過C存活的細(xì)菌轉(zhuǎn)入含氨卡青霉素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。