Question

【題目】Rag2基因缺失小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細(xì)胞�？蒲腥藛T利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對(duì)Rag2基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療，簡(jiǎn)易操作流程如圖所示�；卮鹣铝袉�(wèn)題：

（1）Rag2基因缺失小鼠體內(nèi)不存在特異性免疫，理由是_______________。

（2）圖中③過(guò)程所用培養(yǎng)液成分一般都比較復(fù)雜，除了______以外，還要要加維生素、激素、氨基酸、核苷酸等營(yíng)養(yǎng)成分，以及動(dòng)物血清等物質(zhì)。添加動(dòng)物血清的原因是_______。

（3）圖中②過(guò)程卵母細(xì)胞需除去________，才能與上皮細(xì)胞結(jié)合成重組細(xì)胞。

（4）圖中⑤過(guò)程導(dǎo)入到ES細(xì)胞的是含有Rag2基因的___________。

（5）ES細(xì)胞具有胚胎細(xì)胞的特性，在形態(tài)和功能上的特點(diǎn)分別是________；圖中⑥過(guò)程誘導(dǎo)ES細(xì)胞定向分化成造血干細(xì)胞時(shí)，需向培養(yǎng)液中添加__________。

（6）經(jīng)⑦過(guò)程處理后，為檢測(cè)Rag2基因是否成功表達(dá)，可提取該小鼠骨髓細(xì)胞的蛋白質(zhì)，并用抗Rag2蛋白的抗體進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)，理由是_______________。

Answer 1

【答案】 該小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細(xì)胞，而特異性免疫需要成熟淋巴細(xì)胞的參與 無(wú)機(jī)鹽和有機(jī)鹽類 動(dòng)物血清的營(yíng)養(yǎng)成分比較全，能彌補(bǔ)人工培養(yǎng)基的不足 細(xì)胞核 表達(dá)載體 體積小、細(xì)胞核大、核仁明顯；具有發(fā)育的全能性 分化誘導(dǎo)因子 Rag2基因表達(dá)的蛋白質(zhì)能與抗Rag2蛋白的抗體特異性結(jié)合

【解析】解答本題需要學(xué)生掌握以下知識(shí)點(diǎn)：1、動(dòng)物核移植的概念：將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核移入一個(gè)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體。2、胚胎干細(xì)胞簡(jiǎn)稱ES或EK細(xì)胞，來(lái)源于早期胚胎或原始性腺（即囊胚期的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)）。3、在基因工程中，目的基因和質(zhì)粒需要用同種限制酶進(jìn)行切割，形成相同的黏性末端，再用DNA連接酶連接成重組質(zhì)粒。4、目的基因分子水平上的檢測(cè)：。①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。

（1）據(jù)題干信息可知，Rag2基因缺失小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細(xì)胞，而特異性免疫需要成熟淋巴細(xì)胞的參與，因此Rag2基因缺失小鼠體內(nèi)不存在特異性免疫。

（2）③表示早期胚胎培養(yǎng)過(guò)程，早期胚胎培養(yǎng)所需的培養(yǎng)液成分一般都比較復(fù)雜，除了無(wú)機(jī)鹽、有機(jī)鹽類以外，還要添加維生素、激素、氨基酸、核苷酸、動(dòng)物血清等，添加動(dòng)物血清的原因是動(dòng)物血清的營(yíng)養(yǎng)成分比較全，能彌補(bǔ)人工培養(yǎng)基的不足。

（3）核移植是指將體細(xì)胞核移植到去核卵母細(xì)胞中，因此②核移植過(guò)程中，在核移植前應(yīng)去除卵母細(xì)胞的細(xì)胞核，才能與上皮細(xì)胞結(jié)合成重組細(xì)胞。

（4）目的基因不能直接導(dǎo)入受體細(xì)胞，直接導(dǎo)入目的基因無(wú)法表達(dá)，需要構(gòu)建基因表達(dá)載體后才能導(dǎo)入，因此圖中⑤過(guò)程導(dǎo)入到ES細(xì)胞的是含有Rag2基因的表達(dá)載體。

（5）胚胎干細(xì)胞簡(jiǎn)稱ES或EK細(xì)胞，來(lái)源于早期胚胎或原始性腺（即囊胚期的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)）。具有胚胎細(xì)胞的特性，體積較小，細(xì)胞核大，核仁明顯；在功能上，具有發(fā)育的全能性，可分化為成年動(dòng)物任何一種組織細(xì)胞。圖中⑥過(guò)程誘導(dǎo)ES細(xì)胞定向分化成造血干細(xì)胞時(shí)，需向培養(yǎng)液中添加分化誘導(dǎo)因子。

（6). Rag2基因表達(dá)的蛋白質(zhì)能與抗Rag2蛋白的抗體特異性結(jié)合，所以提取小鼠骨髓細(xì)胞的蛋白質(zhì)進(jìn)行抗原－抗體雜交。