Question

【題目】Ⅰ土壤有“微生物的天然培養(yǎng)基”之稱，下圖表示對土壤中某種微生物進行分離和計數而進行的對樣品的稀釋和稀釋液的取樣培養(yǎng)流程示意圖。請據圖回答有關問題。

（1）圖示統(tǒng)計樣品活菌數目的方法叫做_______________法，主要包括__________操作和____________操作。

（2）當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的_____________，一般選擇菌落數在_______________的平板進行計數。

（3）圖中選擇了104、105、106倍的稀釋液進行平板培養(yǎng)，最可能是測定土壤中_____________（填“細菌”或“放線菌”或“真菌”）的數量，這個平板需要在30～37℃溫度下、PH調至______培養(yǎng)1-2d。Ⅱ.以下是胡蘿卜素的粗提取和鑒定實驗

（1）請完成用萃取法提取胡蘿卜素的實驗流程：胡蘿卜→粉碎→干燥→萃取→過濾→_______→胡蘿卜素。

（2）胡蘿卜素的紙層析標準結果示意圖，圖中A、B、C、D四點中，屬于標準樣品的樣點是_______________，圖中②表示________________。

Answer 1

【答案】稀釋涂布平板 系列（梯度）稀釋 涂布平板 一個活菌 30～300 細菌 中性或微堿性 濃縮 A、D 其它色素或雜質

【解析】

1、活菌計數最常用的是稀釋涂布平板計數法，最關鍵的步驟是梯度稀釋和涂布平板，為了保證結果準確，一般選擇菌落數在30~300之間的平板進行計數。由于在土壤中不同微生物的數量的不同，因此培養(yǎng)不同的微生物進對土壤樣液的稀釋倍數也不同，測定細菌的數量，一般選擇104、105和106的倍稀釋液進行平板培養(yǎng)，測定放線菌的數量，一般選擇103、104和105的倍稀釋液進行平板培養(yǎng)，測定真菌的數量，一般選擇102、103和104的倍稀釋液進行平板培養(yǎng)。

2、胡蘿卜素是橘黃色結晶，化學性質比較穩(wěn)定，不溶于水，微溶于乙醇，易溶于石油醚等有機溶劑。

3、提取天然胡蘿卜素的方法主要有：一是從植物中提��；二是從大面積養(yǎng)殖的巖藻中荻得；三是利用微生物的發(fā)酵生產。

4、最適宜作胡蘿卜素萃取劑的是石油醚。

5、實驗流程為：胡蘿卜→粉碎→干燥→萃取（石油醚）→過濾_→濃縮→胡蘿卜素→鑒定（紙層析法）。

6、對提取的胡蘿卜素粗品鑒定采用的是紙層析法，其原理是色素在濾紙上擴散速度不同，從而使各成分分開。因層析液易揮發(fā)，故應在上方用玻璃蓋蓋嚴，以防止層析液揮發(fā)。在進行點樣時，應注意點樣應該快速細致并保持濾紙干燥。層析液不能沒及濾液基線，否則點樣處的有機成分會溶解在層析液中。

Ⅰ.（1）圖示統(tǒng)計樣品活菌數目的方法叫做稀釋涂布平板法，主要包括系列（梯度）稀釋操作和涂布平板操作。

（2）當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，一般選擇菌落數在30～300 的平板進行計數。

（3）圖中選擇了104、105、106倍的稀釋液進行平板培養(yǎng)，最可能是測定土壤中細菌的數量，這個平板需要在30～37℃溫度下、pH調至中性或微堿性培養(yǎng)1-2d。

Ⅱ. （1）用萃取法提取胡蘿卜素的實驗流程：胡蘿卜→粉碎→干燥→萃取→過濾→濃縮→胡蘿卜素。

（2）胡蘿卜素的紙層析標準結果示意圖，圖中A、B、C、D四點中，屬于標準樣品的樣點是A、D ，圖中②表示其它色素或雜質。