Question

【題目】有些酵母菌可以利用工業(yè)廢甲醇作為碳源進(jìn)行培養(yǎng)，這既可減少污染又可降低生產(chǎn)成本。研究人員擬從土壤樣品中分離該類酵母并進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，下圖所示為操作流程。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

(1)在配制培養(yǎng)基過(guò)程中，對(duì)培養(yǎng)基應(yīng)采用____滅菌。若需要調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH，應(yīng)在滅菌_______（填“前”或“后”）進(jìn)行。

(2)在步驟③中將溫度大約為____（填“25℃”或“50℃”或“80℃”）的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿混勻，冷凝后倒置培養(yǎng)。為判斷實(shí)驗(yàn)中的培養(yǎng)基是否起到了選擇作用，可用含甲醇和其他碳源的培養(yǎng)基作對(duì)照組重復(fù)步驟③，若對(duì)照組的菌落數(shù)目明顯____（填“大于”、“等于”、“小于”）實(shí)驗(yàn)組，則說(shuō)明起到了選擇作用。

(3)在操作④中劃線的某個(gè)平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長(zhǎng)滿了菌落，其他區(qū)域的劃線上卻均無(wú)菌落。操作失誤的原因可能是____。

(4)為重復(fù)利用篩選出的酵母，用海藻酸鈉和氯化鈣制成了包埋酵母的多孔狀凝膠珠。實(shí)驗(yàn)表明：凝膠珠孔徑太大或太小，發(fā)酵效率都很低。請(qǐng)簡(jiǎn)要分析其原因______________。

(5)酵母菌分解甲醇與某種蛋白質(zhì)類酶密切相關(guān)，研究人員擬用凝膠色譜法從酵母菌蛋白質(zhì)提取液中分離出該酶。在裝填凝膠時(shí)要盡量緊密，不得有氣泡存在。因?yàn)闅馀輹?huì)______________，降低分離效果。

Answer 1

【答案】高壓蒸汽滅菌 前 50 大于 第一區(qū)域劃線結(jié)束，接種環(huán)灼燒后未冷卻（或劃線未從第一區(qū)域末端開始） 孔徑太大，酵母菌易漏出；孔徑太小，不利于反應(yīng)物與酵母菌充分接觸 攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序

【解析】

常用的滅菌方法：干熱滅菌法、灼燒滅菌法、高壓蒸汽滅菌法。

常用的接種方法：平板劃線法、稀釋涂布平板法。

分離蛋白質(zhì)的方法：凝膠色譜法—根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的有效方法。

（1）對(duì)培養(yǎng)基應(yīng)該選擇高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌，滅菌前應(yīng)該先調(diào)節(jié)其pH，然后再滅菌。

（2）倒平板的適宜溫度是50度，冷凝后再倒置培養(yǎng)可以避免培養(yǎng)皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染。實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)基中以甲醇作為唯一碳源，對(duì)照組可以用含甲醇和其他碳源的培養(yǎng)基作對(duì)照組重復(fù)步驟③，預(yù)期的結(jié)果是對(duì)照組不僅能利用甲醇的微生物可以生長(zhǎng)，其他的也可以生長(zhǎng)，故菌落數(shù)會(huì)多于實(shí)驗(yàn)組。

（3）步驟④進(jìn)行平板劃線法處理，該過(guò)程中為了避免雜菌污染，每次劃線前后都有灼燒接種環(huán)，為了避免高溫殺死菌種，需要等接種環(huán)冷卻后再劃線，若第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長(zhǎng)滿了菌落，其他區(qū)域的劃線上卻均無(wú)菌落，可能是第一區(qū)域劃線結(jié)束，接種環(huán)灼燒后未冷卻，高溫殺死了菌種。

（4）孔徑太大，酵母菌易漏出；孔徑太小，不利于反應(yīng)物與酵母菌充分接觸，故凝膠珠孔徑太大或太小，發(fā)酵效率都很低。

（5）凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)時(shí)，若裝填凝膠時(shí)有氣泡存在，會(huì)影響蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果，故不能有氣泡存在。