Question

【題目】（1）用限制酶BamHI和BclI（識別序列和切割位點如圖A所示）聯(lián)合切開長度為2.8kb（1 kb = 1000對堿基）的pul基因，并將之與BamHI打開的質(zhì)粒（如圖B所示）粘連拼接，那么所獲得的重組質(zhì)粒（每個質(zhì)粒分子含單個pul基因）用BamHI和EcoRI聯(lián)合酶切，可產(chǎn)生長度分別為__________kb的片段或者長度分別為________________kb的片段。

（2）上述重組質(zhì)粒與大腸桿菌受體細胞混合進行導入操作，之后還需要篩選，這是因為_________________________________________________。

（3）上述含重組質(zhì)粒的大腸桿菌細胞進行大規(guī)模培養(yǎng)可獲得普魯蘭酶產(chǎn)品，在工業(yè)化應用之前可先進行提純及固定化處理，這個過程在生物工程中稱為___________，其目的和原理是___________（填下列選項）。

A．使普魯蘭酶不溶于水，因為支鏈淀粉不溶于水

B．使普魯蘭酶重復使用，因為酶在反應前后性質(zhì)不變

C．使普魯蘭酶更趨穩(wěn)定，因為蛋白質(zhì)固定化后不易被降解

D．使普魯蘭酶活性更高，因為蛋白結(jié)構(gòu)在固定化后往往會改變

Answer 1

【答案】1.4、6.8 kb 4.0、4.2 kb 重組質(zhì)粒導入概率很低 酶工程 B

【解析】

限制酶BamHI和BclI切開pul基因，BamHI打開的質(zhì)粒，連接的時候存在兩種情況，正接和反接。且由圖A可知，BclI切開的黏性末端與BamHI打開的黏性末端的連接產(chǎn)物不能在被限制酶BamHI識別。故重組質(zhì)粒有兩種，5.4（含BamHI和EcoRI酶切位點）+2.8或者是4.0+（1.4+2.8）（BamHI和EcoRI酶切位點）。

（1）根據(jù)以上分析可知，用BamHI和EcoRI聯(lián)合酶切，可產(chǎn)生長度分別為1.4kb、5.4-1.4+2.8=6.8kb的片段或者長度分別為5.4-1.4=4.0kb、2.8+1.4=4.2kb的的片段。

（2）上述重組質(zhì)粒與大腸桿菌受體細胞混合進行導入操作，之后還需要篩選，這是因為重組質(zhì)粒導入成功的概率很低。

（3）上述含重組質(zhì)粒的大腸桿菌細胞進行大規(guī)模培養(yǎng)可獲得普魯蘭酶產(chǎn)品，在工業(yè)化應用之前可先進行提純及固定化處理，這個過程在生物工程中稱為酶工程，其目的和原理是使普魯蘭酶重復使用，因為酶在反應前后性質(zhì)不變，故選B。