Question

【題目】微生物強(qiáng)化采油法是利用某些微生物能降解石油，增大石油的乳化度、降低石油黏度的原理，通過向油井中注入含微生物的水來提高采油率的新技術(shù)。以下是人們篩選、純化和擴(kuò)大培養(yǎng)該類微生物的實(shí)驗(yàn)操作。請(qǐng)回答相關(guān)問題：

（1）為了獲得能降解石油的微生物菌種，可在長(zhǎng)期被石油污染的土壤中取樣，并在含有氮源、______等的培養(yǎng)基中添加______進(jìn)行選擇培養(yǎng)。

（2）如圖為平板劃線法接種后的示意圖。在圖示劃線接種的整個(gè)操作過程中，對(duì)接種環(huán)至少需進(jìn)行______次灼燒滅菌。接種后蓋上皿蓋，將平板倒置放入恒溫箱中培養(yǎng)，其中“倒置”的目的是______。在適宜條件下培養(yǎng)劃線接種后的圖示平板，發(fā)現(xiàn)第四劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地生長(zhǎng)有菌落，而第五劃線區(qū)域所劃的第一條線上無菌落，其他劃線上都有菌落。據(jù)圖分析造成劃線無菌落最可能的操作失誤是：______。

（3）接種培養(yǎng)一段時(shí)間后在培養(yǎng)基上形成降油圈，此時(shí)選取______就可能獲得高效菌株。

（4）在擴(kuò)大培養(yǎng)過程中需要對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)：以0.2mL培養(yǎng)液樣品涂布于固體培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，最后統(tǒng)計(jì)了三個(gè)平板的菌落數(shù)分別是199、185、219．則樣品中該種微生物的數(shù)量為______個(gè)/mL，該統(tǒng)計(jì)結(jié)果應(yīng)該______（請(qǐng)選填“低于”或“高于”）活菌的實(shí)際數(shù)目。與顯微鏡直接計(jì)數(shù)法相比，此計(jì)數(shù)方法測(cè)得的該種微生物數(shù)較______（請(qǐng)選填“少”或“多”）。

Answer 1

【答案】水、無機(jī)鹽 石油 6 防止培養(yǎng)皿中的水珠落入培養(yǎng)基和避免培養(yǎng)基水分揮發(fā)過快 接種環(huán)灼燒后為冷卻 降油圈大的菌落 1005 低于 少

【解析】

從土壤中分離微生物的一般步驟是：土壤取樣、選擇培養(yǎng)、梯度稀釋、涂布培養(yǎng)和篩選菌株。此過程中需要使用選擇培養(yǎng)基，培養(yǎng)基需要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，常用的接種方法主要有稀釋涂布平板法和平板劃線法。

（1）為了獲得能降解石油的微生物菌種，可在長(zhǎng)期被石油污染的土壤中取樣應(yīng)選用以石油為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選和純化該類微生物，培養(yǎng)基中還應(yīng)加入水、無機(jī)鹽和氮源。

（2）接種環(huán)在每次接種前和接種結(jié)束后都要通過灼燒來滅菌，所以完成步驟④中5次劃線操作前都要灼燒滅菌，接種結(jié)束后還需灼燒滅菌1次，以防止造成污染，因此完成步驟④共需灼燒接種環(huán)6次。接種后蓋上皿蓋，為了避免培養(yǎng)基被污染和防止培養(yǎng)基水分過快揮發(fā)，應(yīng)將平板倒置放入恒溫箱中培養(yǎng)。第五劃線區(qū)域所劃的第一條線上無菌落最可能的操作失誤是接種環(huán)灼燒后為冷卻，導(dǎo)致高溫殺死菌種。

（3）該類微生物是厭氧微生物，接種后應(yīng)密封培養(yǎng)，一段時(shí)間后選擇降油圈大的菌落進(jìn)行培養(yǎng)可獲得高效菌株。

（4）計(jì)算微生物的數(shù)量應(yīng)取三個(gè)平板的平均值，即（199+219+185）÷3÷0.2=1005個(gè)/mL。由于一個(gè)菌落可能是一個(gè)或多個(gè)細(xì)菌長(zhǎng)成的，因此該結(jié)果會(huì)低于實(shí)際值。由于前者統(tǒng)計(jì)的是活菌數(shù)，與顯微鏡直接計(jì)數(shù)法相比，此計(jì)數(shù)方法測(cè)得的該種微生物數(shù)較少