Question

【題目】如圖為利用人成纖維細(xì)胞(具分裂能力、能在HAT培養(yǎng)基上存活)和小鼠骨髓瘤細(xì)胞(具分裂能力、不能在HAT培養(yǎng)基上存活)進(jìn)行人類基因定位的操作示意圖，請回答相關(guān)問題。

		雜交細(xì)胞
		A	B	C
人類 染色體	1	－	＋	＋
	2	＋	－	＋
	3	＋	＋	－
酶	m	＋	－	＋
	n	－	＋	＋
	p	＋	－	＋
	q	－	＋	＋

(1)圖示方法是__________技術(shù)的應(yīng)用，該技術(shù)的基礎(chǔ)是____________技術(shù)。

(2)操作所用的成纖維細(xì)胞應(yīng)傳代________代以內(nèi)，誘導(dǎo)融合時需要加入的促融劑是_____。

(3)人、鼠細(xì)胞先經(jīng)過細(xì)胞膜融合形成________細(xì)胞，再經(jīng)過一次_________，形成單核細(xì)胞。

(4)HAT培養(yǎng)基起________培養(yǎng)作用，培養(yǎng)時溫度應(yīng)為________℃，操作中加入烏本苷的目的是____________________________。

(5)如表所示為雜交細(xì)胞A、B、C中存在的人類染色體及人類特有的4種酶(“＋”表示存在，“－”表示不存在)，這4種酶均為單基因編碼產(chǎn)生，據(jù)表判斷，編碼________酶的基因位于染色體2上，排列方式呈________。

Answer 1

【答案】(1)動物細(xì)胞融合 動物細(xì)胞培養(yǎng)

(2)10 PEG(或滅活病毒)

(3)多核 有絲分裂

(4)選擇 36.5±0.5 除去未發(fā)生融合的細(xì)胞（出去成纖維細(xì)胞）

(5)m和p線性

【解析】（1）由圖分析，該過程為動物細(xì)胞融合，其基礎(chǔ)是動物細(xì)胞培養(yǎng)。

（2）目前使用的正常細(xì)胞通常為10代以內(nèi)的，可以保持細(xì)胞正常的二倍體核型。誘導(dǎo)兩個動物細(xì)胞融合，原理是細(xì)胞膜的流動性；可以采用物理（離心、振動）、化學(xué)（PEG）、生物誘導(dǎo)（滅活的病毒）融合方法，其中區(qū)別于植物原生質(zhì)體融合的是生物誘導(dǎo)融合中采用的滅活病毒。

（3）成纖維細(xì)胞能在HAT培養(yǎng)基上存活，小鼠骨髓瘤細(xì)胞不能在HAT培養(yǎng)基上存活，說明HAT培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基，其中需要加入血漿等天然物質(zhì)。

（4）培養(yǎng)動物細(xì)胞時一般pH設(shè)置為7.2-7.4；誘導(dǎo)細(xì)胞融合后，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)3中融合細(xì)胞，成纖維細(xì)胞自身融合、骨髓瘤細(xì)胞自身融合和雜交瘤細(xì)胞，為了除去成纖維細(xì)胞，則需要在培養(yǎng)基中加入烏本苷。

（5）據(jù)表判斷，雜交細(xì)胞A中存在2和3號染色體，表達(dá)出酶m和p；雜交細(xì)胞B存在1和2號染色體，表達(dá)出酶n和q；說明編碼m和p酶的基因位于染色體2上，且呈線性排列。