Question

【題目】下表中列出了幾種限制酶識別序列及其切割位點，圖1、圖2中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點。請回答下列問題：

限制酶	BamH I	Hind Ⅲ	EcoR I	Sma I
識別序 列及切 割位點	ATCC CCTA	GCTT TTCG	ATTC CTTA	CCGG GGCC

（1）一個圖l所示的質(zhì)粒分子經(jīng)SmaⅠ切割前后，分別含有個游離的磷酸基團。
（2）若對圖中質(zhì)粒進行改造，插入的SmaⅠ酶切位點越多，質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性越。
（3）用圖中的質(zhì)粒和外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是。
（4）為了獲取重組質(zhì)粒，將切割后的質(zhì)粒與目的基因片段混合，并加入酶。
（5）重組質(zhì)粒中抗生素抗性基因的作用是為了。

Answer 1

【答案】
（1）0、2
（2）高
（3）SmaⅠ會破壞質(zhì)粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因
（4）DNA連接
（5）鑒定和篩選含有目的基因的細(xì)胞
【解析】（1）由于質(zhì)粒在切割前是一個環(huán)狀DNA分子，因此上面沒有游離的磷酸基團；當(dāng)質(zhì)粒被切割后形成了兩個末端各有1個游離的磷酸基團，故共有2個游離的磷酸基團． （2）SmaⅠ酶切位點越多，表示G和C這一對堿基對所占的比例就超高，而G和C之間含有三個氫鍵，故其熱穩(wěn)定性超高．（3）質(zhì)粒抗生素抗性基因為標(biāo)記基因，由圖可知，標(biāo)記基因和外源DNA目的基因中 均含有SmaI酶切位點，都可以被SmaI酶破環(huán)，故不能使用該酶剪切質(zhì)粒和含有目的基因的DNA． （4）為了使目的基因和質(zhì)粒之間的磷酸二脂鍵相連，需要用DNA連接酶相連接．（5）抗生素抗性基因是一種抗性基因，抗性基因是為了鑒別和篩選目的基因是否導(dǎo)入到受體細(xì)胞內(nèi)．
【考點精析】本題主要考查了基因工程的原理及技術(shù)的相關(guān)知識點，需要掌握基因工程的原理是利用DNA重組技術(shù)才能正確解答此題．