Question

【題目】Rag2基因缺失小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細(xì)胞�？蒲腥藛T利用胚眙干細(xì)胞(ES細(xì)胞)對(duì)Rag2基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療，其技術(shù)流程如圖(圖中數(shù)字序號(hào)表示的是相關(guān)過(guò)程)。請(qǐng)回答:

(1)過(guò)程①將進(jìn)行培養(yǎng)的上皮細(xì)胞注入去核的卵母細(xì)胞中，接受細(xì)胞核的卵母細(xì)胞應(yīng)處于__________________時(shí)期。

(2)過(guò)程②利用的技術(shù)是___________________________，當(dāng)重組胚胎培養(yǎng)到囊胚期時(shí)，可從其_________分離出ES細(xì)胞，ES細(xì)胞在功能上具有______________的特點(diǎn)。

(3)過(guò)程③中獲取的目的基因是____________________，若要將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞，需要構(gòu)建_______________________，構(gòu)建之前可以根據(jù)_______________________設(shè)計(jì)引物，利用PCR技術(shù)對(duì)目的基因進(jìn)行擴(kuò)增。為了檢測(cè)ES細(xì)胞的DNA上是否插入了干擾素基因，可采用______________技術(shù)。

(4)按此方法和圖示技術(shù)流程，完成Rag2基因缺失小鼠的基因治療涉及的酶有___________和耐高溫的DNA聚合酶(Taq酶)等。通測(cè)Rag2基因的表達(dá)情況，可提取治療后小鼠骨髓細(xì)胞的蛋白質(zhì)，用__________________進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)。

Answer 1

【答案】MⅡ中 早期胚胎培養(yǎng) 內(nèi)細(xì)胞團(tuán) 發(fā)育的全能性 （正常的）Rag2基因 含（正常的）Rag2基因的基因表達(dá)載體 （正常的）Rag2基因的脫氧核苷酸序列（或堿基對(duì)序列或遺傳信息） DNA分子雜交 限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶和胰蛋白酶 抗Rag2蛋白的抗體

【解析】

1、動(dòng)物核移植的概念：將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核移入一個(gè)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體。

2、胚胎干細(xì)胞簡(jiǎn)稱ES或EK細(xì)胞，來(lái)源于早期胚胎或原始性腺（即囊胚期的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)）。

3、在基因工程中，目的基因和質(zhì)粒需要用同種限制酶進(jìn)行切割，形成相同的黏性末端，再用DNA連接酶連接成重組質(zhì)粒。

4、目的基因分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。

（1）卵細(xì)胞體外接受細(xì)胞核，卵母細(xì)胞需在體外培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂中期。

（2）過(guò)程②是將重組胚胎進(jìn)行培養(yǎng)形成早期胚胎，故利用的是早期胚胎培養(yǎng)技術(shù)；ES細(xì)胞是胚胎干細(xì)胞的簡(jiǎn)稱，在囊胚時(shí)期分離的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞分離培養(yǎng)；ES細(xì)胞在功能上具有發(fā)育的全能性。

（3）通過(guò)圖示可知，將重組的造血干細(xì)胞導(dǎo)入缺失Rag2基因的小鼠體內(nèi)，故過(guò)程③中獲取的目的基因是Rag2基因，若要將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞，需要構(gòu)建含（正常的）Rag2基因的基因表達(dá)載體，設(shè)計(jì)引物要遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，所以根據(jù)Rag2基因的核苷酸序列進(jìn)行設(shè)計(jì)，利用PCR技術(shù)對(duì)目的基因進(jìn)行擴(kuò)增。通過(guò)DNA分子雜交技術(shù)，檢測(cè)ES細(xì)胞的DNA上是否插入了干擾素基因。

（4）圖示③是基因工程，涉及的酶有限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶和耐高溫的DNA聚合酶(Taq酶)，老鼠上皮細(xì)胞分散開可用胰蛋白酶等。檢測(cè)表達(dá)情況，可提取治療后小鼠骨髓細(xì)胞的蛋白質(zhì)，用抗Rag2蛋白的抗體進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)。