Question

【題目】海洋藻類上常附著有多種微生物，其中部分在生物醫(yī)藥和日用化工等生產(chǎn)領(lǐng)域具有重要的經(jīng)濟(jì)價值，而部分會產(chǎn)生某些毒素污染環(huán)境或毒害動物，人們需要對它們進(jìn)行大量的研究。請回答下列問題：

（1）若要將微生物采用平板劃線法進(jìn)行分離操作，正確的是圖______。

（2）長期保存菌種時，應(yīng)將培養(yǎng)的菌液與___________充分混勻后，放在-20℃的冷凍箱保存，丟棄已經(jīng)接種過微生物的培養(yǎng)基前，往往需要先行滅菌，以免____________。

（3）用稀釋涂布平板法測定某種微生物的數(shù)量，在接種前通常需要檢測固體培養(yǎng)基是否被污染，檢測的方法是____________________________________。

稀釋涂布平板法統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比樣品中活菌的實(shí)際數(shù)目要低，這是因為_______。

（4）鑒別培養(yǎng)基中需加入_________才能對微生物中的纖維素分解菌加以篩選。鑒別培養(yǎng)后，培養(yǎng)基中出現(xiàn)了幾個以菌落為中心的透明圈，根據(jù)___________________（填 “菌落直徑”、“透明 圈直徑”或“透明圈直徑/菌落直徑”）的大小可初步篩選出高效纖維素分解菌。

（5）發(fā)酵工程常常需要對某些微生物進(jìn)行固定化，最常用的方法是______________ 法。某真菌產(chǎn)生的油脂不易揮發(fā)，可選用_____________（填“萃取法”或“水蒸氣蒸餾法”）從菌體中提取，其提取效率主要取決于_________________________。

Answer 1

【答案】B 滅菌的甘油 以免污染環(huán)境或者對其他生物產(chǎn)生毒害 將未接種的培養(yǎng)基在適宜的條件下培養(yǎng)一段時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落出現(xiàn) 當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，觀察到的只是一個菌落 剛果紅 透明圈/菌落直徑 包埋法 萃取法 萃取劑的性質(zhì)和使用量

【解析】

1、菌種保存

	臨時保存法	甘油管藏法
適用對象	頻繁使用的菌種	長期保存的菌種
培養(yǎng)及類型	固體斜面培養(yǎng)基	液體培養(yǎng)基
溫度	4℃	-20℃
方法	菌落長成后于冰箱中保存，每3～6個月將菌種從舊的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基上	將培養(yǎng)的菌液與等體積滅菌后的甘油混合均勻后于冷凍箱內(nèi)保存
缺點(diǎn)	菌種易被污染或產(chǎn)生變異	\\

2、在進(jìn)行第二次以及其后的劃線操作時'要從上一次劃線的末端開始劃線。每次劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落。

3、從土壤中分離纖維素分解菌的一般步驟是：土壤取樣、選擇培養(yǎng)、梯度稀釋、涂布培養(yǎng)和篩選菌株；篩選纖維素分解菌需要用以纖維素為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基，纖維素分解菌可以用剛果紅染液進(jìn)行鑒別，在培養(yǎng)基中加入剛果紅染液，在其菌落周圍會出現(xiàn)透明圈。

（1）采用平板劃線法進(jìn)行分離操作時，每次劃線都要從上一次劃線的末端開始，且首尾不能相連，故選B。

（2）長期保存菌種時，應(yīng)將培養(yǎng)的菌液與滅菌的甘油充分混勻后，放在-20℃的冷凍箱保存；丟棄已經(jīng)接種過微生物的培養(yǎng)基前，往往需要先行滅菌，以免以免污染環(huán)境或者對其他生物產(chǎn)生毒害。

（3）培養(yǎng)某種微生物時，在接種前要檢測培養(yǎng)基是否被污染。采用的檢測方法是將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生。稀釋涂布平板法可以通過統(tǒng)計菌落數(shù)來估算樣品中的活菌數(shù)，但菌落數(shù)往往比實(shí)際細(xì)菌數(shù)要低，原因是用稀釋涂布平板法統(tǒng)計菌落數(shù)目時，有些細(xì)菌聚集在一起，形成一個菌落，這樣統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目少。

（4）鑒別培養(yǎng)基是在培養(yǎng)基中加入某種試劑或化學(xué)藥品，通過微生物產(chǎn)生的某種代謝產(chǎn)物與其反應(yīng)產(chǎn)生明顯的特征變化而加以篩選，對纖維素分解菌加以篩選時通常需要加入剛果紅；使用剛果紅染色法時，纖維素酶作用的透明圈的直徑與菌落直徑比越大，酶活性越強(qiáng)，故根據(jù)透明圈直徑/菌落直徑的大小可初步篩選出高效纖維素分解菌。

（5）固定化酶和固定化細(xì)胞技術(shù)是指利用物理或化學(xué)方法，將酶或細(xì)胞固定在一定空間內(nèi)的技術(shù)，包括包埋法、化學(xué)結(jié)合法和物理吸附法。對微生物進(jìn)行固定，最常用的方法是包埋法；對于不易揮發(fā)的某真菌產(chǎn)生的油可選用萃取法從菌體中提取。其提取效率主要取決于萃取劑的性質(zhì)和使用量。