Question

【題目】基因敲除技術(shù)是指通過(guò)一定的途徑使機(jī)體特定的基因失活或缺失的技術(shù)。通常意義上的基因敲除主要是應(yīng)用DNA同源重組原理，用設(shè)計(jì)的同源片段替代靶基因片段，從而達(dá)到基因敲除的目的�；�因敲除技術(shù)常用于建立某種特定基因缺失的生物模型。例如，基因敲除模式小鼠制備技術(shù)圖解如下：

請(qǐng)回答：

（1）圖中ES細(xì)胞（胚胎干細(xì)胞）存在囊胚的_______部位，它具有體積小、細(xì)胞核大、____________的特點(diǎn)。

（2）neor(新霉素抗性基因)位于基因表達(dá)載體的________和_________之間。

（3）轉(zhuǎn)染ES細(xì)胞過(guò)程既可采用電穿孔法，亦可采用_________法。

（4）篩選中靶ES細(xì)胞需在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液中添加_____，圖中字母X過(guò)程采用_____技術(shù)。

（5）嵌合鼠和白色純合體小鼠交配產(chǎn)生的后代有___種表現(xiàn)型，其中黑色鼠是被破壞基因X的_____（填“純合體”或“雜合體”）。

Answer 1

【答案】內(nèi)細(xì)胞團(tuán) 核仁明顯 啟動(dòng)子 終止子 顯微注射法 新霉素 胚胎移植 2 雜合體

【解析】

囊胚包括內(nèi)細(xì)胞團(tuán)和滋養(yǎng)層，其中內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞，具有發(fā)育的全能性，屬于胚胎干細(xì)胞，具有體積小、細(xì)胞核大、核仁明顯的特點(diǎn)。

基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)抗原抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）圖中ES細(xì)胞（胚胎干細(xì)胞）存在囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)部位，它具有體積小、細(xì)胞核大、核仁明顯的特點(diǎn)。

（2）neor(新霉素抗性基因)位于基因表達(dá)載體的啟動(dòng)子和終止子之間。

（3）轉(zhuǎn)染ES細(xì)胞過(guò)程既可采用電穿孔法，亦可采用顯微注射法。

（4）篩選中靶ES細(xì)胞需在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液中添加新霉素，圖中字母X表示將胚胎移入代孕母鼠，該過(guò)程采用胚胎移植技術(shù)。

（5）嵌合鼠和白色純合體小鼠交配產(chǎn)生的后代有2種表現(xiàn)型，其中黑色鼠是被破壞基因X的雜合體。