Question

【題目】下圖為三種質(zhì)粒和一個含目的基因的片段的示意圖。復(fù)制原點是質(zhì)粒能正常復(fù)制的必 需組成。圖中 Ap 為氨芐青霉素抗性基因，Tc 為四環(huán)素抗性基因， lacZ 為藍(lán)色顯色基因。 EcoR Ⅰ、 PvuⅠ為相應(yīng)的限制酶切割位點，括號內(nèi)的數(shù)據(jù)是該切點與復(fù)制原點的距離，單位為 kb（1 kb= 1000 個堿基對長度）。請回答下列問題：

（1）用圖中的目的基因與質(zhì)粒構(gòu)建基因表達(dá)載體時，應(yīng)該選擇質(zhì)粒_______，選擇的限制酶 是_______。

（2）如果選擇的質(zhì)粒與目的基因重組成功，并且在受體細(xì)胞中能正常表達(dá)，則所形成的重組質(zhì)粒 用 EcoRI 完全酶切，并進(jìn)行電泳觀察，可出現(xiàn)的片段長度有_____或______。

（3）將基因表達(dá)載體導(dǎo)入大腸桿菌時，可將大腸桿菌先用 處理。導(dǎo)入大腸桿菌后，為了篩選 出含目的基因的大腸桿菌，在普通瓊脂培養(yǎng)基中還需加入______，形成的菌落顏色為_______ 。

（4）如果要檢測導(dǎo)入目的基因的大腸桿菌是否合成相應(yīng)的蛋白質(zhì)，可以采用_____ 法。

Answer 1

【答案】B PvuⅠ 3.6kb、3.1kb或1.1kb、5.6kb Ca2+（或CaCl2） 氨芐青霉素 白色 抗原—抗體雜交

【解析】

分析題圖：基因表達(dá)載體由啟動子、終止子、標(biāo)記基因和目的基因組成．質(zhì)粒A中缺少標(biāo)記基因，質(zhì)粒C中的復(fù)制原點會被酶PvuⅠ切割，所以用圖中的目的基因與質(zhì)粒構(gòu)建基因表達(dá)載體時，應(yīng)該選擇質(zhì)粒B。

（1）含有目的基因的外源DNA中含有兩種限制酶的切割位點，但用限制酶EcoRⅠ切割會破壞目的基因，因此只能選擇限制酶PvuⅠ進(jìn)行切割．質(zhì)粒A中缺少標(biāo)記基因，質(zhì)粒C中的復(fù)制原點會被酶PvuⅠ切割，所以用圖中的目的基因與質(zhì)粒構(gòu)建基因表達(dá)載體時，應(yīng)該選擇質(zhì)粒B。

（2）質(zhì)粒長度為2.7kb，目的基因長度為4.0kb，所以重組質(zhì)粒長度為6.7kb，目的基因與運載體重組時可能會正向連接，也可能會反向連接，因此所形成的重組質(zhì)粒用EcoRⅠ完全酶切，并進(jìn)行電泳觀察，可出現(xiàn)的片段長度有3.6kb、3.1kb或1.1kb、5.6kb。

（3）用限制酶PvuⅠ切割會破壞質(zhì)粒B中的lcZ基因，但不會破壞氨芐青霉素抗性基因，因此導(dǎo)入大腸桿菌后，為了篩選出含目的基因的大腸桿菌，在普通瓊脂培養(yǎng)基中還需加入氨芐青霉素，形成的菌落顏色為白色。

（4）檢測導(dǎo)入目的基因的大腸桿菌是否合成相應(yīng)的蛋白質(zhì)，常采用抗原-抗體雜交法。