【題目】利用基因工程技術(shù)培育轉(zhuǎn)基因抗凍番茄,該過程需要用多種限制酶,如圖依次表示EcoR I、Sma I、Nae I三種限制酶的識別序列及切割位點,

請回答:

(1)上述限制酶在特定位點切割DNA,其實質(zhì)是斷開DNA分子每條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的_________,切割后產(chǎn)生了_________末端。

(2)利用EcoR I 和Nae I酶切得某種魚的抗凍蛋白基因,可與被EcoR I 和Sam I酶切后的質(zhì)料連接成重組質(zhì)料,原因是______________________________________________________。

(3)重組質(zhì)粒導(dǎo)入番茄后,欲檢測抗凍蛋白基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA,需利用_________作探針。

(4)利用抗凍蛋白制備出相應(yīng)的_________,然后進(jìn)行抗原-抗體雜交,觀察到雜交帶出現(xiàn),尚不足以確定轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育是否成功。因此,還應(yīng)將轉(zhuǎn)基因番茄_________,以確定其耐寒能力是否提高。

(5)應(yīng)用PCR擴增目的基因時,需要在基因組數(shù)據(jù)庫中查詢目的基因的_________序列,以便合成引物。PCR過程第一輪循環(huán)的模板是____________________________________。

【答案】 磷酸二酯鍵 黏性末端和平末端 相同的黏性末端之間可連接,且不同的平末端之間也可以連接 標(biāo)記的含有目的基因的DNA片段(或“標(biāo)記的抗凍蛋白基因”或“標(biāo)記的含有目的基因的DNA單鏈”) 抗體 置于寒冷環(huán)境培養(yǎng)(或進(jìn)行個體水平檢測或進(jìn)行抗凍實驗) 核苷酸(或脫氧核苷酸或堿基) 目的基因的兩條脫氧核苷酸鏈(或目的基因)

【解析】試題分析:由圖可知,EcoRⅠ酶能切出粘性末端,SmaⅠ和NaeⅠ酶都能切出平末端,相同的黏性末端之間才可能連接,但不同的平末端之間也可能可以連接,因此要獲得抗凍蛋白基因,可以用EcoR I和Sma I切割或EcoR I和Nae I。

(1)限制酶能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列,并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開,產(chǎn)生黏性末端和平末端。
(2)EcoRⅠ酶切出粘性末端,SmaⅠ和NaeⅠ酶切出平末端,利用EcoRⅠ和NAE酶切得某種魚的抗凍蛋白基因,可與被EcoRⅠ和SamⅠ酶切后的質(zhì)粒連接成重組質(zhì)粒,原因是相同的黏性末端之間可連接,且不同的平末端之間也可以連接。
(3)欲檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA,需利用標(biāo)記的含有目的基因的DNA片段作探針,進(jìn)行核酸分子雜交,若出現(xiàn)雜交帶,說明目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA。
(4)利用抗凍蛋白制備出相應(yīng)的抗體,然后進(jìn)行抗原-抗體雜交,觀察到雜交帶出現(xiàn),尚不足以確定轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育是否成功。因此還應(yīng)進(jìn)行個體生物學(xué)水平的鑒定,將轉(zhuǎn)基因番茄置于寒冷環(huán)境培養(yǎng),以確定其耐寒能力是否提高。
(5)應(yīng)用PCR擴增目的基因時,需要在基因組數(shù)據(jù)庫中查詢目的基因的核苷酸(或脫氧核苷酸或堿基)序列,以便合成引物.PCR過程第一輪循環(huán)的模板是目的基因的兩條脫氧核苷酸鏈(或目的基因)。

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C.③②①④⑧⑩⑨
D.⑤②①④⑦⑩⑨

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3長跑時人體體溫會上升,此時機體增加散熱的生理過程有__________和汗腺的分泌增強,維持體溫恒定。

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