Question

【題目】回答下列（一）、（二）小題：

（一）普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人將地衣芽孢桿菌的α-淀粉酶基因轉(zhuǎn)入酵母菌中，經(jīng)篩選得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌種（過(guò)程如圖1所示）

（1）圖1中,為達(dá)到篩選目的,平板內(nèi)的固體培養(yǎng)基應(yīng)以 作為唯一碳源。②、③過(guò)程需重復(fù)幾次,目的是 。

（2）某同學(xué)嘗試過(guò)程③的操作,其中一個(gè)平板經(jīng)培養(yǎng)后的菌落分布如圖2所示。該同學(xué)的接種方法是 ；推測(cè)該同學(xué)接種時(shí)可能的操作失誤是 。

（3）以淀粉為原料,用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的適宜條件下密閉發(fā)酵,發(fā)酵罐需要先排氣,其原因是 。

（4）上述工程酵母菌培養(yǎng)過(guò)程中，有關(guān)操作正確的是

A．玻璃刮刀用火焰灼燒進(jìn)行滅菌

B．培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿后進(jìn)行滅菌

C．倒平板和取菌液都必須在酒精燈火焰旁進(jìn)行

D．獲得的菌種如果需要保存，可置于37℃恒溫保存

（二）下表中列出了幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)，圖1、圖2中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）用圖中質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒，應(yīng)選用 兩種限制酶切割，酶切后的載體和目的基因片段，通過(guò) 酶作用后獲得重組質(zhì)粒。

（2）為了篩選出轉(zhuǎn)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌，應(yīng)在篩選平板培養(yǎng)基中添加 。

（3）若BamH I酶切的DNA末端與Bcl I酶切的DNA末端連接，連接部位的6個(gè)堿基對(duì)序列為 ，對(duì)于該部位，這兩種酶 （填“都能”、“都不能”或“只有一種能”）切開。

（4）若用Sau3A I切圖1質(zhì)粒最多可能獲得 種大小不同的DNA片段。

（5）基因工程中，某些噬菌體經(jīng)改造后可以作為載體，其DNA復(fù)制所需的原料來(lái)自于 。

Answer 1

【答案】（一）（1）淀粉 篩選出真正高效利用淀粉的工程酵母菌菌種

（2）涂布分離法 涂布不均勻

（3）工程酵母菌利用淀粉的速度很快，發(fā)酵產(chǎn)生CO2的速度也很快

（4）C

（二）（1）Bcll和Hindlll DNA連接 （2）四環(huán)素

（3） 都不能 （4）7 （5）受體細(xì)胞

【解析】（一）（1）普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，而工程酵母菌可以高效利用淀粉，所以用以淀粉為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基可以選出工程酵母菌；②、③過(guò)程重復(fù)幾次的目的是純化獲得分解淀粉能力強(qiáng)的酵母菌（或篩選出真正高效利用淀粉的工程酵母菌菌種）。

（2）由圖2可知，該同學(xué)采用的接種方法是稀釋涂布平板法，但菌落比較集中，沒(méi)有很好的分散開來(lái)，可能是涂布不均勻?qū)е碌?/span>。

（3）普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，而工程酵母菌可以高效利用淀粉，即將淀粉分解產(chǎn)生葡萄糖的能力強(qiáng)，導(dǎo)致酒精發(fā)酵速率快，產(chǎn)生二氧化碳的速率更快，所以接種工程酵母菌的發(fā)酵罐要先排氣。

（4）玻璃刮刀用火焰灼燒進(jìn)行滅菌可能改變刮刀剛度，A項(xiàng)錯(cuò)誤；培養(yǎng)基應(yīng)在分裝前進(jìn)行滅菌，B項(xiàng)錯(cuò)誤；倒平板和取菌液都必須在酒精燈火焰旁進(jìn)行，C項(xiàng)正確；獲得的菌種如果需要保存，一般置于4-6℃下保存，D項(xiàng)錯(cuò)誤。

（二）（1）選擇的限制酶應(yīng)在目的基因兩端存在識(shí)別位點(diǎn)，但BamH I酶可能使質(zhì)粒中的啟動(dòng)子丟失，因此只能選BclI和HindⅢ兩種限制酶切割；酶切后的載體和目的基因片段，通過(guò)DNA連接酶作用后獲得重組質(zhì)粒。

（2）為了篩選出轉(zhuǎn)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌，根據(jù)質(zhì)粒上的抗性基因，應(yīng)在平板培養(yǎng)基中添加四環(huán)素。

（3）根據(jù)BamH I和Bcl I酶切位點(diǎn)，BamH I酶切的DNA末端與Bcl I酶切的DNA末端連接，連接部位的6個(gè)堿基對(duì)序列為；與兩種酶的酶切位點(diǎn)均不同，所以對(duì)于該部位，這兩種酶都不能切開。

（4）根據(jù)BamH I、Bcl I和Sau3A I的酶切位點(diǎn)，Sau3A I在質(zhì)粒上有3個(gè)酶切位點(diǎn)，完全酶切可得到記為A、B、C三種片段，若部分位點(diǎn)被切開，可得到AB、AC、BC、ABC四種片段，所以用用Sau3A I切圖1質(zhì)粒最多可能獲得7種大小不同的DNA片段。

（5）噬菌體不能獨(dú)立生活，必需依賴活細(xì)胞才能生存，所以其作為載體，其DNA復(fù)制所需的原料來(lái)自所導(dǎo)入的受體細(xì)胞。