Question

【題目】(一）為從養(yǎng)豬場周圍土壤中分離產(chǎn)脲酶的微生物，進行了如下實驗。

（1）培養(yǎng)基的制備：本實驗需在LB固體培養(yǎng)基和尿素固體培養(yǎng)基上進行接種，因尿素_____________，只能用_____________過濾。下列對本實驗選用的尿素固體培養(yǎng)基和LB固體培養(yǎng)基的敘述，錯誤的是（____）

A.都要進行高壓蒸汽滅菌B.都含有N源C.都要添加瓊脂糖D.都要添加酚紅指示劑

（2）制備細菌懸液：在無菌條件下，將土樣加到含有適量____________的三角瓶中，振蕩搖勻，并以此方法制備不同濃度的土壤稀釋液。

（3）接種：本實驗采用的接種方法是____________。

(二）某研究小組利用下圖所示的現(xiàn)代生物科學技術(shù)生產(chǎn)藥用蛋白一一人組織纖溶酶原激活物（htPA)。請回答：

（1）構(gòu)建重組表達載體時，通常用_____________切割htPA基因與載體，形成________，再通過DNA連接酶連接。

（2）為獲取更多的實驗用受精卵，要對供卵母羊注射相應激素，使其________________，獲得較多的卵母細胞。采集的精子需要經(jīng)過________________處理，才具備受精能力。

（3）若想獲得更多轉(zhuǎn)htPA基因母羊，還可以對含有htPA基因的胚胎進行________________。 然后再通過________________技術(shù)可獲得較多后代。

（4）下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（____）

A.載體上的抗性基因有利于篩選含重組DNA的細胞和促進目的基因的表達

B.大腸桿菌質(zhì)粒是基因工程最常用的載體

C.若目的基因的序列是未知的，可選用PCR技術(shù)擴增目的基因

D.DNA連接酶催化形成氫鍵和磷酸二酯鍵的形成

Answer 1

【答案】 加熱會分解 G6玻璃砂漏斗 D 無菌水 涂布法（或涂布分離法） 相同限制性核酸內(nèi)切 相同的粘性末端 超數(shù)排卵 獲能 胚胎分割 胚胎移植 B

【解析】試題分析：從土壤中分離目的微生物的一般步驟是：土壤取樣、選擇培養(yǎng)、梯度稀釋、涂布培養(yǎng)和篩選菌株�；�因工程技術(shù)的基本步驟：目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成；基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等；將目的基因?qū)�入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因?qū)�入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法；目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)；個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

(一）（1）尿素加熱會分解，所以實驗過程中只能用G6玻璃砂漏斗進行過濾。尿素固體培養(yǎng)基和LB固體培養(yǎng)基都含有N元素，一般都用高壓蒸汽滅菌法進行滅菌，且都需要進入瓊脂以使得培養(yǎng)基成為固態(tài)；后者需要加入酚紅指示劑，但是前者不需要。

（2）為了防止雜菌污染，在無菌條件下，將土樣加到含有適量無菌水的三角瓶中，振蕩搖勻，并以此方法制備不同濃度的土壤稀釋液。

（3）據(jù)圖可知，該實驗的接種方法為稀釋涂布平板法。

(二）（1）在基因工程中，構(gòu)建基因表達載體時，把目的基因與運載體一般用同種限制酶進行切割，再用DNA連接酶連接，以構(gòu)建基因表達載體。

（2）超數(shù)排卵處理時，需要注射促性腺激素；采集的精子必須經(jīng)過獲能處理后才具備受精能力。

（3）早期胚胎細胞具有全能性，可利用胚胎分割和胚胎移植技術(shù)獲得多個轉(zhuǎn)基因個體。

（4）載體上的抗性基因是可用于篩選含重組DNA的細胞，但不能促進目的基因的表達，A錯誤；大腸桿菌質(zhì)粒是基因工程最常用的載體，B正確；利用PCR技術(shù)擴增目的基因的前提，是要有“一段已經(jīng)目的基因的核苷酸序列”，C錯誤；DNA連接酶催化形成磷酸二酯鍵的形成，D錯誤。