Question

【題目】以下是基因工程四個(gè)主要操作程序：

①基因表達(dá)載體的構(gòu)建 ②將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞 ③目的基因的獲取 ④目的基因的檢測(cè)與鑒定

請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）進(jìn)行③操作時(shí)，可以從基因文庫(kù)中獲取，基因文庫(kù)分為_____________ 兩種，其區(qū)別是_____________ ，PCR擴(kuò)增也是獲取目的基因常用的方法，進(jìn)行PCR時(shí)，需要向擴(kuò)增儀中加入熱穩(wěn)定DNA聚合酶、四種原料、_____________ 以及引物，合成引物的前提是_____________ 。PCR擴(kuò)增時(shí)，與引物結(jié)合的是_____________ 。

（2）進(jìn)行操作①時(shí)，應(yīng)先選擇合適的載體，常見(jiàn)的載體是質(zhì)粒，質(zhì)粒的本質(zhì)是______；如圖是常用的質(zhì)粒載體，基因工程中利用BamH I限制酶識(shí)別CCATCC序列，并在GG之間切割，通過(guò)BamH I限制酶切割形成的末端屬于___________，科研人員利用該質(zhì)粒完成基因工程，則通過(guò)___________基因供重組DNA的鑒定與選擇。

Answer 1

【答案】基因組文庫(kù)和部分基因文庫(kù) 基因組文庫(kù)包含一種生物的全部基因而部分基因分庫(kù)只包含該種生物的部分基因 模板DNA 有一段已知的目的基因核苷酸序列 目的基因DNA受熱變性后解鏈成單鏈的相應(yīng)互補(bǔ)序列 雙鏈環(huán)狀DNA分子 黏性末端 抗生素B抗性

【解析】

1、PCR的過(guò)程：①高溫變性：DNA解旋過(guò)程；②低溫復(fù)性：引物結(jié)合到互補(bǔ)鏈DNA上；③中溫延伸：合成子鏈。PCR擴(kuò)增中雙鏈DNA解開(kāi)不需要解旋酶，高溫條件下氫鍵可自動(dòng)解開(kāi)。

2、基因文庫(kù)是指將含有某種生物不同基因的DNA片段導(dǎo)入受體菌的群體中儲(chǔ)存，這個(gè)受體菌群體稱為基因文庫(kù)�；�因組文庫(kù)包含某種生物所有的基因，部分基因文庫(kù)包含某種生物的部分基因，如cDNA文庫(kù)。

（1）基因文庫(kù)分為基因組文庫(kù)和部分基因文庫(kù)兩種，其區(qū)別是基因組文庫(kù)包含一種生物的全部基因，而部分基因分庫(kù)只包含該種生物的部分基因。PCR擴(kuò)增目的基因時(shí)，需要向擴(kuò)增儀中加入熱穩(wěn)定DNA聚合酶、四種原料、模板DNA以及兩種引物。由于引物需要與DNA模板鏈互補(bǔ)，并引導(dǎo)子鏈合成，所以合成引物的前提是有一段已知的目的基因核苷酸序列。PCR擴(kuò)增時(shí)，與引物結(jié)合的是目的基因DNA受熱變性后解鏈成單鏈的相應(yīng)互補(bǔ)序列。

（2）質(zhì)粒是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、獨(dú)立于細(xì)菌擬核之外，并具有自我復(fù)制能力的很小的雙鏈環(huán)狀DNA分子，故其本質(zhì)是雙鏈環(huán)狀DNA分子；由于BamHI限制酶識(shí)別CCATCC序列，并在GG之間切割，可知通過(guò)BamHI限制酶切割形成的末端具有裸露的堿基，屬于黏性末端。由于用BamHI限制酶切割質(zhì)粒會(huì)破壞抗生素A抗性基因，所以科研人員利用該質(zhì)粒完成基因工程時(shí)，通過(guò)抗生素B抗性基因供重組DNA的鑒定與選擇。