Question

【題目】血紅蛋白是人和其他脊椎動物紅細胞的主要組成成分，負責血液中O2或CO2的運輸．請根據(jù)血紅蛋白的提取和分離流程圖回答問題．
（1）將實驗流程補充完整：A為 ， B為 ． 凝膠色譜法是根據(jù)而達到蛋白質(zhì)分離的有效方法．
（2）洗滌紅細胞的目的是去除 ， 洗滌次數(shù)過少，無法除去；離心速度過高和時間過長會使一同沉淀，達不到分離的效果．洗滌干凈的標志是 ． 釋放血紅蛋白的過程中起作用的是 ．
（3）在洗脫過程中加入物質(zhì)的量濃度為20mmol/L的磷酸緩沖液（pH為7.0）的目的是 ． 如果紅色區(qū)帶 ， 說明色譜柱制作成功．

Answer 1

【答案】
（1）血紅蛋白的釋放；樣品的加入和洗脫；相對分子質(zhì)量的大小
（2）雜蛋白（血漿蛋白）；血漿蛋白；白細胞和淋巴細胞；離心后的上清液中沒有黃色；蒸餾水和甲苯
（3）準確模擬生物體內(nèi)的生理環(huán)境，保持體外的pH和體內(nèi)的一致；均勻一致的移動
【解析】解：（1）樣品處理過程為：紅細胞的洗滌→血紅蛋白的釋放→分離血紅蛋白溶液→透析，所以A表示血紅蛋白的釋放，B表示樣品的加入和洗脫．凝膠色譜法的原理是分子量大的分子通過多孔凝膠顆粒的間隙，路程短，流動快；分子量小的分子穿過多孔凝膠顆粒內(nèi)部，路程長，流動慢．（2）洗滌紅細胞的目的是去除雜質(zhì)蛋白，釋放血紅蛋白的過程是讓紅細胞吸水脹破．如果分層不明顯，可能是洗滌次數(shù)少，未能除去血漿蛋白的原因．此外，離心速度過高和時間過長，會使白細胞和淋巴細胞一同沉淀，也得不到純凈的紅細胞，影響后續(xù)血紅蛋白的提取純度．重復洗滌三次，直至上清液中沒有黃色，表明紅細胞已洗滌干凈．由于甲苯是表面活性劑的一種，可將細胞膜溶解，從而使細胞破裂．（3）磷酸緩沖液（pH為7.0）能夠準確模擬生物體內(nèi)的生理環(huán)境，保持體外的pH和體內(nèi)的一致．如果凝膠色譜柱裝填得很成功、分離操作也正確的話，能清楚地看到血紅蛋白的紅色區(qū)帶均勻、狹窄、平整，隨著洗脫液緩慢流出；如果紅色區(qū)帶歪曲、散亂、變寬，說明分離的效果不好，這與凝膠色譜柱的裝填有關(guān)．所以答案是：（1）血紅蛋白的釋放 樣品的加入和洗脫 相對分子質(zhì)量的大�。�2）雜蛋白（血漿蛋白） 血漿蛋白 白細胞和淋巴細胞 離心后的上清液中沒有黃色 蒸餾水和甲苯（3）準確模擬生物體內(nèi)的生理環(huán)境，保持體外的pH和體內(nèi)的一致 均勻一致的移動