Question

【題目】牛支原體是嚴(yán)重危害牛養(yǎng)殖業(yè)的一種病原菌，它能引起肺炎、關(guān)節(jié)炎等多種疾病。VspX蛋白是牛支原體表面的一種脂蛋白，在牛支原體感染宿主細(xì)胞時(shí)起黏附作用�？蒲腥藛T制備抗VspX單克隆抗體,并進(jìn)行相關(guān)研究。

（1）將等量的純化VspX蛋白作為_________分別注射到5只小鼠體內(nèi)，經(jīng)過二次免疫后測(cè)定小鼠抗VspX抗體的免疫效果，取其中免疫效果最好的1號(hào)小鼠用于后面的融合實(shí)驗(yàn)。

（2）在融合前三天，對(duì)1號(hào)小鼠加強(qiáng)免疫一次，目的是__________。然后取小鼠的脾臟細(xì)胞用_________試劑誘導(dǎo)與骨髓瘤細(xì)胞融合，用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選得到__________。

（3）一段時(shí)間后，將（2）所得細(xì)胞接種到多孔培養(yǎng)板上，進(jìn)行抗體陽性檢測(cè)，檢測(cè)原理如下圖。

①在檢測(cè)時(shí)需要將VspX蛋白固定于固相載體表面制成_________，并加入多孔板培養(yǎng)槽中的_________（細(xì)胞、上清液），即待測(cè)樣本。

②加入酶標(biāo)抗體后一段時(shí)間，需要用洗滌劑將未與_________結(jié)合的酶標(biāo)抗體洗去。

③加入相應(yīng)酶促反應(yīng)底物顯色后，顏色的深淺可代表_________。

（4）將上述細(xì)胞經(jīng)_________酶處理，制成細(xì)胞懸液，除添加一般營養(yǎng)物質(zhì)外，還需加入________，并置于_________中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，提取抗VspX單克隆抗體與不同抗原進(jìn)行雜交檢測(cè)，結(jié)果如下圖

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明抗VspX單克隆抗體不能與3、4結(jié)合，具有很強(qiáng)的____________，可用于后續(xù)關(guān)于牛支原體所引發(fā)相關(guān)疾病__________等方面的研究。

Answer 1

【答案】抗原 刺激機(jī)體產(chǎn)生更多的漿細(xì)胞 PEG 雜交瘤細(xì)胞 固相抗原 上清液 抗VspX抗體 抗VspX抗體的量 胰蛋白 血清血漿 二氧化碳培養(yǎng)箱 特異性 診斷、治療

【解析】

單克隆抗體的制備過程：首先用特定抗原注射小鼠體內(nèi)，使其發(fā)生免疫，小鼠體內(nèi)產(chǎn)生具有免疫能力的B淋巴細(xì)胞。利用動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)將B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合。

單克隆抗體制備過程中的兩次篩選：第一次篩選：利用特定選擇培養(yǎng)基篩選，獲得雜交瘤細(xì)胞，即AB型細(xì)胞(A為B淋巴細(xì)胞，B為骨髓瘤細(xì)胞)，不需要A、B、AA、BB型細(xì)胞；第二次篩選：利用多孔板法和抗原-抗體雜交法篩選，獲得產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞。

間接法測(cè)抗體，其基本原理：將特異性抗原包被在固相載體上，形成固相抗原，加入待測(cè)樣本（含相應(yīng)抗體），其中抗體與固相抗原形成抗原-抗體復(fù)合物，再加入酶標(biāo)記的抗抗體（抗人免疫球蛋白抗體，亦稱二抗），與上述抗原-抗體復(fù)合物結(jié)合。此時(shí)加入底物，復(fù)合物上的酶則催化底物而顯色。

（1）VspX蛋白作為抗原注射到小鼠體內(nèi)，使小鼠產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答。

（2）為了使刺激機(jī)體產(chǎn)生更多的漿細(xì)胞，對(duì)1號(hào)小鼠加強(qiáng)免疫一次。然后用PEG（聚乙二醇）使小鼠的脾臟細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，再通過選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選得到雜交瘤細(xì)胞。

（3）①將特異性抗原包被在固相載體上，故將VspX蛋白固定于固相載體表面制成固相抗原，并加入多孔板培養(yǎng)槽中的上清液，即待測(cè)樣本（含相應(yīng)抗體）。

②加入酶標(biāo)抗體與上述抗原-抗體復(fù)合物結(jié)合，同時(shí)需要用洗滌劑將未與抗VspX抗體結(jié)合的酶標(biāo)抗體洗去。

③加入相應(yīng)酶促反應(yīng)底物，復(fù)合物上的酶則催化底物而顯色，顏色的深淺可代表抗VspX抗體的量。

（4）加入胰蛋白酶使細(xì)胞分散開，制成細(xì)胞懸液，培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞，除添加一般營養(yǎng)物質(zhì)外，還需加入血清血漿，并置于二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明抗VspX單克隆抗體不能與3、4結(jié)合，具有很強(qiáng)的特異性，VspX單克隆抗體能與1、2結(jié)合可用于后續(xù)關(guān)于牛支原體所引發(fā)相關(guān)疾病診斷、治療等方面的研究。