Question

7.（14分）人外周血單核細(xì)胞能合成白細(xì)胞介素2（IL-2）。該蛋白為淋巴因子，可增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，但在體內(nèi)易被降解。研究人員將IL-2基因與人血清白蛋白（HSA）基因拼接成一個(gè)融合基因，在酵母菌中表達(dá)出具有IL-2生理功能、且不易降解的IL-2- HSA融合蛋白。技術(shù)流程如右圖。請(qǐng)回答：

（1）從健康人外周血分離得到的單核細(xì)胞，應(yīng)置于                            氣體環(huán)境中，并在適宜溫度和pH條件下培養(yǎng)48h。提取細(xì)胞總RNA，生成cDNA。圖中PCR過程的模板是                        。

（2）表達(dá)載體1中的位點(diǎn)a應(yīng)含有圖中           酶的識(shí)別序列，才能成功構(gòu)建表達(dá)載體2。

（3）表達(dá)載體2導(dǎo)入酵母菌后，融合基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA中，與IL-2蛋白對(duì)應(yīng)的堿基序列中不能含有          密碼，才能成功表達(dá)出IL-2-HSA融合蛋白。

（4）白細(xì)胞介素在單核細(xì)胞內(nèi)合成的直接模板是             ，在體液免疫過程中，白細(xì)胞介素可作用于受抗原刺激的B細(xì)胞，使B細(xì)胞增殖、分化，形成                細(xì)胞。

（5）將表達(dá)載體2導(dǎo)入酵母細(xì)胞，在培養(yǎng)液中培養(yǎng)一段時(shí)間后離心，取                

（上清液/菌體）進(jìn)行產(chǎn)物鑒定。

Answer 1

【答案】

7.（14分）

（1）95%空氣和5%CO₂        含有目的基因(IL-2基因)的cDNA    

（2）限制酶BglⅡ      

（3）終止

（4）mRNA       漿細(xì)胞和記憶細(xì)胞    

（5）上清液

【解析】(1) 從健康人外周血分離得到的單核細(xì)胞，應(yīng)置于95%空氣和5%CO₂氣體環(huán)境中，并在適宜溫度和pH條件下培養(yǎng)48h。圖中PCR過程的模板是含有目的基因(IL-2基因)的cDNA。由mRNA到cDNA的過程是反轉(zhuǎn)錄過程。

(2)根據(jù)圖解可知目的基因的兩端分別是由限制酶EcoRⅠ、BglⅡ切割的，同一限制酶切割才能形成相同的黏性末端，表達(dá)載體1中具有EcoRⅠ的識(shí)別位點(diǎn)，因此位點(diǎn)a應(yīng)與限制酶BglⅡ的識(shí)別位點(diǎn)相同，才能成功構(gòu)建表達(dá)載體2。

(3)mRNA中如果含有終止密碼子，則會(huì)導(dǎo)致翻譯終止，不能合成目的蛋白。

(4) 白細(xì)胞介素在單核細(xì)胞內(nèi)合成的直接模板是mRNA ，在體液免疫過程中，白細(xì)胞介素可作用于受抗原刺激的B細(xì)胞，使B細(xì)胞增殖、分化，形成漿細(xì)胞和記憶細(xì)胞。

（5）檢測(cè)蛋白質(zhì)，可以利用蛋白質(zhì)作為抗原，導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生抗體進(jìn)行檢測(cè)，由于抗體具有專一性，因此抗原—抗體雜交技術(shù)可以迅速檢測(cè)出酵母菌是否表達(dá)出IL－2－HSA融合蛋白，在培養(yǎng)液中培養(yǎng)一段時(shí)間后離心，取上清液進(jìn)行產(chǎn)物鑒定。