Question

【題目】下表中列出了幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)，圖1、圖2中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）一個(gè)圖1所示的質(zhì)粒分子經(jīng)SmaⅠ切割前后，分別含有__________、__________個(gè)游離的磷酸基團(tuán)。

（2）若對(duì)圖中質(zhì)粒進(jìn)行改造，插入的SmaⅠ酶切位點(diǎn)越多，質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性越_________。

（3）用圖中的質(zhì)粒和外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒，________(填“能”或“不能,使用SmaⅠ切割，因?yàn)?/span>________。

（4）與只使用EcoRⅠ相比較，使用BamHⅠ和HindⅢ兩種限制酶同時(shí)處理質(zhì)粒、外源DNA的優(yōu)點(diǎn)在于可以防止_________________。

（5）為了獲取重組質(zhì)粒，將切割后的質(zhì)粒與目的基因片段混合，并加入_____________酶。

（6）重組質(zhì)粒中抗生素抗性基因的作用是為了_____________________。

（7）cDNA探針是目前應(yīng)用最為廣泛的一種探針。制備cDNA探針時(shí)，首先需提取、分離獲得__________作為模板，在___________的催化下合成cDNA探針。

Answer 1

【答案】 0 2 高 不能 SmaⅠ會(huì)破壞質(zhì)粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因 質(zhì)粒和含目的基因的外源DNA片段自身環(huán)化 DNA連接 鑒別和篩選含有目的基因的細(xì)胞 mRNA 逆轉(zhuǎn)錄酶

【解析】試題分析：本題考查基因工程，考查對(duì)基因工程的工具、步驟的理解和應(yīng)用。解答此類題目，應(yīng)根據(jù)題圖明確不同限制酶的切割位點(diǎn)，根據(jù)基因工程的操作要求選擇合適的限制酶。

（1）質(zhì)粒為環(huán)狀DNA，沒(méi)有游離的磷酸基團(tuán)；圖1所示的質(zhì)粒分子含有1個(gè)SmaⅠ酶切位點(diǎn)，切割后形成1個(gè)鏈狀DNA，含有2個(gè)游離的磷酸基團(tuán)。

（2）SmaⅠ酶切位點(diǎn)含有G—C堿基對(duì)，含氫鍵數(shù)目較多，對(duì)圖中質(zhì)粒進(jìn)行改造，插入的SmaⅠ酶切位點(diǎn)越多，質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性越高。

（3）用圖中的質(zhì)粒和外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒，不能用SmaⅠ切割，因?yàn)?/span>SmaⅠ會(huì)破壞質(zhì)粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因。

（4）使用BamHⅠ和HindⅢ兩種限制酶同時(shí)處理質(zhì)粒、外源DNA，質(zhì)粒和目的基因兩端均含有不同的黏性末端，可以防止質(zhì)粒和目的基因的自身環(huán)化。

（5）切割后的質(zhì)粒與目的基因片段混合，加入DNA連接酶，可形成重組質(zhì)粒。

（6）重組質(zhì)粒中抗生素抗性基因作為標(biāo)記基因，可用于鑒別和篩選含有目的基因的細(xì)胞。

（7）制備cDNA探針時(shí)，首先需提取、分離獲得mRNA作為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶的催化下合成cDNA探針。