【題目】科研人員運(yùn)用兩種方法分離杜氏鹽藻、球等鞭金藻細(xì)胞的葉綠體,并提取葉綠體DNA,主要實驗步驟和結(jié)果如下,其中SDS能瓦解生物膜,氯仿異戊醇不溶于水且密度均大于水,DNA不溶于氯仿異戊醇。請回答:

步驟①收集藻細(xì)胞:將兩種藻細(xì)胞培養(yǎng)液進(jìn)行預(yù)處理后,離心取沉淀物。

步驟②獲取葉綠體粗:提物4℃下分別破碎兩種藻細(xì)胞后,再分別用差速離心法和密度梯度離心法分離獲取葉綠體粗提物(原理示意圖如下)。

步驟③去除雜質(zhì)DNA:向步驟②的葉綠體粗提物中加入DNA酶、緩沖液,37℃靜置15min后,離心取沉淀物。

步驟④粗提葉綠體DNA:向步驟③獲得的葉綠體中加入緩沖液、SDS、蛋白酶K,60℃水浴2h,離心取上清液。再向上清液中加入氯仿異戊醇,在4℃下離心取? 

步驟⑤純化葉綠體DNA:向粗提溶液中加入3mol·L-1醋酸鈉及預(yù)冷的95%酒精,低溫靜置1h后,離心棄上清液。加預(yù)冷的95%酒精、離心洗滌1~2次,取沉淀物用超純水溶解。

步驟⑥D(zhuǎn)NA純度和濃度:測定利用分光光度法測量并計算葉綠體DNA的純度及濃度,結(jié)果如上右表(表中OD260/OD280值越接近1.8說明DNA越純)。

(1)步驟①中預(yù)處理時應(yīng)將藻液置于____處24h,以降低葉綠體中淀粉粒的含量,有利于分離得到完整葉綠體。步驟②在利用差速離心法分離獲得葉綠體前,需要先在____(填“低于”“等于”或“高于”)4 000r·min-1下離心去除細(xì)胞壁、核物質(zhì)等。

(2)步驟③依據(jù)的主要原理是____,去除的“雜質(zhì)DNA”來源于____

(3)步驟④中離心后應(yīng)取____。步驟⑤中用95%的冷酒精離心洗滌過程要注意動作輕緩,其目的是____________________________________________________________。

(4)根據(jù)實驗結(jié)果分析,____法較適于分離提取葉綠體DNA,原因是_________________________________________。

【答案】黑暗 低于 DNA酶能催化DNA水解 細(xì)胞核 上清液 防止葉綠體DNA斷裂 差速離心 獲得的葉綠體DNA數(shù)量多且純度高

【解析】

根據(jù)題干信息分析。該實驗的目的是利用差速離心法和密度梯度離心法對杜氏鹽藻、球等鞭金藻細(xì)胞的葉綠體進(jìn)行分離,并提取葉綠體DNA。據(jù)圖分析,差速離心法的原理是利用不同的轉(zhuǎn)速分離細(xì)胞勻漿中的各種物質(zhì)或結(jié)構(gòu),最終獲得葉綠體,因此圖中的“?”應(yīng)該是不同于后面的轉(zhuǎn)速的;蔗糖密度梯度離心法的結(jié)果是小顆粒、中等顆粒和大顆粒分別位于試管的不同位置。

(1)為了降低葉綠體中淀粉粒的含量,有利于分離得到完整葉綠體,步驟①中預(yù)處理時應(yīng)該應(yīng)將藻液置于黑暗處24h。

(2)步驟③中加入的DNA酶能夠?qū)NA水解,進(jìn)而達(dá)到去除雜質(zhì)DNA的目的;步驟②離心獲得的是細(xì)胞壁、核物質(zhì)等,因此該雜質(zhì)DNA來源于細(xì)胞核。

(3)步驟④為粗提葉綠體DNA,離心取上清液并加入氯仿異戊醇,而DNA不溶于氯仿異戊醇,因此在4℃下離心取的是上清液。步驟⑤中用95%的冷酒精離心洗滌過程要注意動作輕緩,以防止葉綠體DNA斷裂。

(4)根據(jù)題意分析,已知OD260/OD280值越接近1.8說明DNA越純,則表格數(shù)據(jù)顯示,差速離心法獲得的葉綠體DNA數(shù)量多且純度高,比較適于分離提取葉綠體DNA。

練習(xí)冊系列答案
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1)圖①中AC段和FG段形成的原因是______________,L點(diǎn)→M點(diǎn)表示___________,該過程體現(xiàn)了細(xì)胞膜具有______________的特點(diǎn)。

2)圖②中的B圖為__________細(xì)胞,對應(yīng)圖①中的__________段;虻姆蛛x和自由組合發(fā)生于圖①中的__________段。

3)圖②中A細(xì)胞所處的細(xì)胞分裂時期是___________________。

4)圖①中與GH段和OP段相對應(yīng)的細(xì)胞中,染色體數(shù)目_________(填“相同”或“不同”)。

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B. 步驟②需控制凝膠珠在NaCl溶液中的浸泡時間

C. 步驟③之前應(yīng)計算凝膠珠中雙歧桿菌的平均數(shù)

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(1)過程①屬于____(變異類型)。

(2)過程②所需的原料是____,過程③先斷裂再形成的化學(xué)鍵是____。

(3)與圖中RNA團(tuán)簇相比,基因中特有的堿基對是____。RNA團(tuán)簇使剪接因子失去功能,會導(dǎo)致細(xì)胞中____(過程)的模板缺失。

(4)若基因內(nèi)含子中CCT多次重復(fù),能否引起RNA團(tuán)簇,簡要說明理由。_____________

(5)依據(jù)該模型推測,可通過阻斷____治療肌張力障礙。

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【題目】甲圖為磷脂分子,該物質(zhì)在乙圖的哪些細(xì)胞器中含有(

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【題目】如圖表示不同化學(xué)元素所組成的化合物,以下說法不正確的是

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C.若③為大分子物質(zhì),且能儲存遺傳信息,則③一定是DNA

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C.若此細(xì)胞為次級卵母細(xì)胞,則可通過分裂產(chǎn)生兩種基因型的卵細(xì)胞

D.由此圖可推知正常情況下,該動物的體細(xì)胞內(nèi)最多可含8條染色體

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