下圖(一)為某基因工程中利用的質(zhì)粒筒圖,小箭頭所指分別為限制性內(nèi)切酶EcoRI、BamHI的酶切位點,ampR為青霉素(抗生素)抗性基因,tctR為四環(huán)素(抗生素)抗性基因,P為啟動因子,T為終止子,ori為復(fù)制原點。已知目的基因的兩端分別有包括EcoRI、BamHI在內(nèi)的多種酶的酶切位點。下圖(二)為幾種酶作用于基因的位置。請回答下列問題:
(1)在基因工程中常用的工具有三種:一是用作切取目的基因的 酶;二是將目的基因與運載體拼接的 酶;三是作為運載體的質(zhì)粒。
(2)將含有目的基因的DNA與經(jīng)特定的酶切后的動載體(質(zhì)粒)進行拼接形成重組DNA,理論上講,重組DNA可能有“ ”、“ ”、“ ”三種,其中有效的(所需要的)基因表達載體是 ,因此需要對這些拼接產(chǎn)物進行分離提純。
(3)利用圖(一)所示的質(zhì)粒拼接形成的3種拼接產(chǎn)物(基因表達載體)與無任何抗藥性的原核宿主細胞接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基中,能生長的原核宿主細胞所含有的拼接產(chǎn)物(基因表達載體)是 。
(4)有效的基因表達載體成功導(dǎo)入受體細胞進行表達時,首先需要進行轉(zhuǎn)錄,RNA聚合酶識別和結(jié)合的位點是圖(一)中的 。在動物基因工程中,將基因表達載體導(dǎo)入受體細胞的常用方法是 。在植物基因工程中,將基因表達載體導(dǎo)入受體細胞的常用方法是 。是因為這種微生物很容易侵染到
中,從而把它的Ti質(zhì)粒上的 轉(zhuǎn)移到受體細胞染色體的DNA上。
(5)在基因工程中,作用于圖(二)所示a位置的酶是 ;作用于b位置的酶是
。
科目:高中生物 來源:2010年浙江省杭州學(xué)軍中學(xué)高三上學(xué)期第一次月考生物試題 題型:綜合題
(8分)為了解基因結(jié)構(gòu),通常選取一特定長度的線性DNA分子,先用一種限制酶切割,通過電泳技術(shù)將單酶水解片段分離,計算相對大。蝗缓笤儆昧硪环N酶對單酶水解片段進行降解,分析片斷大小。下表是某小組進行的相關(guān)實驗。
已知 一線性DNA序列共有5000bp(bp為堿基對) | 第一步水解 | 產(chǎn)物(單位bp) | 第二步水解 | 產(chǎn)物(單位bp) |
A切割酶 | 2100 | 將第一步水解分離后,分別用B酶切割 | 1900 200 | |
1400 | 800 600 | |||
1000 | 1000 | |||
500 | 500 | |||
B酶切割 | 2500 | 將第一步水解產(chǎn)物分離后,分別用A酶切割 | 1900 600 | |
1300 | 800 500 | |||
1200 | 1000 200 | |||
經(jīng)A酶和B酶同時切割 | 1900 1000 800 600 500 200 |
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科目:高中生物 來源: 題型:
為了解基因結(jié)構(gòu),通常選取一特定長度的線性DNA分子,先用一種限制酶切割,通過電泳技術(shù)將單酶水解片段分離,計算相對大。蝗缓笤儆昧硪环N酶對單酶水解片段進行降解,分析片斷大小。下表是某小組進行的相關(guān)實驗。
已知 一線性DNA序列共有5000bp(bp為堿基對) | 第一步水解 | 產(chǎn)物(單位bp) | 第二步水解 | 產(chǎn)物(單位bp) |
A切割酶 | 2100 | 將第一步水解分離后,分別用B酶切割 | 1900 200 | |
1400 | 800 600 | |||
1000 | 1000 | |||
500 | 500 | |||
B酶切割 | 2500 | 將第一步水解產(chǎn)物分離后,分別用A酶切割 | 1900 600 | |
1300 | 800 500 | |||
1200 | 1000 200 | |||
經(jīng)A酶和B酶同時切割 | 1900 1000 800 600 500 200 |
(1)由實驗可知,在這段已知序列上,A酶與B酶的識別序列分別為 個和 個。
(2)根據(jù)表中數(shù)據(jù),請在下圖中標出相應(yīng)限制性酶的酶切位點并注明相關(guān)片斷的大小。
(3)已知BarnH I與BglⅡ的識別序列及切割位點如下圖所示,用這兩種酶和DNA連接酶對一段含有數(shù)個BarnH工和BglⅡ識別序列的DNA分子進行反復(fù)的切割、連接操作,若干循環(huán)后 和 序列明顯增多。
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