Question

【題目】萌發(fā)的小麥種子中有α淀粉酶和β淀粉酶。α淀粉酶較耐熱，但在pH為3．6下可迅速失活，而β淀粉酶不耐熱，在70°C條件下15min后失活。

實(shí)驗(yàn)材料和用具：萌發(fā)的小麥種子、麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)液、5%淀粉溶液、斐林試劑、蒸餾水、水浴鍋等。

實(shí)驗(yàn)步驟：

一:制作麥芽糖梯度液。取7支干凈的試管，編號(hào)，按表加入試劑后60℃水浴加熱2min。

二：用萌發(fā)的小麥種子制備淀粉酶溶液。

三：將裝有淀粉酶溶液的試管70℃水浴15min后迅速冷卻。

四：另取4支試管，編號(hào)A、B、C、D，向A、B試管中各加5mL5%淀粉溶液，向C、D試管中各加2mL已經(jīng)處理的酶溶液（忽略其中含有的少量麥芽糖）和蒸餾水，將4支試管40℃水浴10min。將C、D試管中的溶液分別加入到A、B試管中，搖勻后繼續(xù)40℃水浴10min。

五：取A、B試管中反應(yīng)溶液各2mL分別加入E、F試管，然后向E、F試管分別加入 ，并進(jìn)行 ，觀察顏色變化。

結(jié)果分析：將E試管中顏色與步驟一中獲得的麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行比較，獲得該試管中麥芽糖濃度，并計(jì)算出α淀粉酶催化效率。請(qǐng)分析回答：

（1）本實(shí)驗(yàn)的目的是測(cè)定小麥種子中 。

（2）步驟一的57試管中加入蒸餾水的量（X、Y、Z）分別是 、 、 （單位mL）。

（3）實(shí)驗(yàn)中B試管所起的具體作用是檢測(cè)實(shí)驗(yàn)使用的淀粉溶液中 。

（4）若要測(cè)定另一種淀粉酶的活性，則需在第 步驟進(jìn)行改變。

Answer 1

【答案】（共8分，每空1分）

2mL斐林試劑 60°C水浴加熱2min后

（1）α淀粉酶催化效率 （2）0．6 0．4 0（3）是否存在還原糖

（4）三

【解析】步驟一：由表中數(shù)據(jù)可知，蒸餾水+麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)溶液=2mL，所以表中X為2、Y為1．4、Z為0．6。

步驟二：本題實(shí)驗(yàn)的目的是測(cè)定40℃條件下α-淀粉酶的催化效率，可用萌發(fā)的小麥種子制取α-淀粉酶溶液，但萌發(fā)的小麥種子也含有β-淀粉酶，所以需除去β-淀粉酶以防止干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果．因?yàn)?/span>α-淀粉酶在pH3．6以下迅速失活，但耐熱，β-淀粉酶不耐熱，在70℃條件下15min后就失活，所以將制備的淀粉酶溶液置于70℃怛溫箱中15min，取出后迅速冷卻以即可獲得α-淀粉酶溶液（若要測(cè)定β-淀粉酶的活性，則需將制備的淀粉酶溶液置于pH低于3．6溶液中，獲得β-淀粉酶溶液）。

步驟四：反應(yīng)結(jié)束后，需用斐林試劑進(jìn)行鑒定，使用斐林試劑時(shí)需要在60℃水浴中加熱3min后，再觀察顏色變化。結(jié)果分析：最后將E1、E2、E3試管中的顏色與1-7號(hào)試管進(jìn)行比較，獲得該試管中麥芽糖濃度，并計(jì)算出a-淀粉酶的催化效率的平均值。

討論：（1）實(shí)驗(yàn)中F試管時(shí)對(duì)照組，作用是排除淀粉酶溶液中還原糖對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾從而對(duì)結(jié)果進(jìn)行校對(duì)。

（2）若要測(cè)定β-淀粉酶的活性，則需要對(duì)步驟二進(jìn)行改變，具體的操作是將淀粉酶溶液置于pH低于3．6溶液中一段時(shí)間從而獲得β-淀粉酶。