回答基因工程的有關(guān)問題：(共9分)
（1）構(gòu)建基因工程表達(dá)載體時(shí)，用不同類型的限制酶切割DNA后，可能產(chǎn)生黏性末端，也可能產(chǎn)生_____末端。若要在限制酶切割目的基因和質(zhì)粒后使其直接進(jìn)行連接，則應(yīng)選擇能使二者產(chǎn)生_____（相同，不同）黏性末端的限制酶。
（2）利用大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素時(shí)，構(gòu)建的表達(dá)載體含有人胰島素基因等，其中RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位是_____。在用表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌時(shí)，常用_____處理大腸桿菌，以利于表達(dá)載體進(jìn)入。為了檢測胰島素基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，可用放射性同位素標(biāo)記的______ 作探針與mRNA雜交，該雜交技術(shù)稱為______。為了檢測胰島素基因轉(zhuǎn)錄的mRNA是否翻譯成胰島素，常用______          技術(shù)。
(3)如果要將某目的基因通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入植物細(xì)胞，先要將目的基因插入農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的_____中，然后用該農(nóng)桿菌感染植物細(xì)胞，通過DNA重組將目的基因插入植物細(xì)胞的______上。

用來治療糖尿病的胰島素，過去主要靠從動(dòng)物體器官、組織中提取，但因受原料限制，無法推廣。現(xiàn)在，可以用發(fā)酵工程的方法來生產(chǎn)胰島素。若用大腸桿菌發(fā)酵來生產(chǎn)胰島素，并結(jié)合基因工程，寫出其生產(chǎn)過程：

(1)構(gòu)建轉(zhuǎn)入人胰島素基因的工程菌。

①提取目的基因：用胰島素基因探針從人的胰島細(xì)胞中獲取             ，再用      法制備人的胰島細(xì)胞目的基因。

②目的基因與運(yùn)載體結(jié)合：從大腸桿菌的細(xì)胞中提取       ，并用      酶切割質(zhì)粒，使其露出               。用同一種酶切割目的基因使其產(chǎn)生相同的               ，再將目的基因插人質(zhì)粒切口處，加入適量的               酶，這樣就形成了一個(gè)               和               的重組DNA。

③將目的基因?qū)�人受體細(xì)胞：將大腸桿菌用          處理，以增大               的通透性，讓重組DNA進(jìn)人大腸桿菌體內(nèi)。

④目的基因的檢測和表達(dá)：在用一定的方法檢測出目的基因已導(dǎo)人大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)，并            后，再對(duì)該種大腸桿菌擴(kuò)大培養(yǎng)。

(2)發(fā)酵生產(chǎn)。如圖為發(fā)酵罐，回答：（括號(hào)中填數(shù)字,如[1]）

①配制適合大腸桿菌的培養(yǎng)基，調(diào)整        ，然后對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行             處理并裝入發(fā)酵罐，將上述大腸桿菌接種于發(fā)酵罐發(fā)酵

②若經(jīng)檢測若發(fā)現(xiàn)放料口排出的舊培養(yǎng)基中微生物細(xì)胞形態(tài)多樣，甚至出現(xiàn)畸形，則此時(shí)微生物的生長處于     期，加料口[   ]添加新培養(yǎng)基的速度應(yīng)該適當(dāng)     ，并從[   ]以適當(dāng)速度通入     

③若該裝置階段發(fā)酵的目的是為擴(kuò)大培養(yǎng)生產(chǎn)酵母菌菌種，則應(yīng)盡可能延長         期，采取的主要措施為：加料口放料的速度都           ，通人的無菌空氣成分中應(yīng)           ，攪拌的速度適當(dāng)             

④影響發(fā)酵過程中溫度變化的因素是                

⑤發(fā)酵過程中pH變化的原因是                     

⑥攪拌器攪拌的作用是                          

(3)發(fā)酵完畢后，從培養(yǎng)基中            并             胰島素，經(jīng)過一定的加工成為藥用胰島素，經(jīng)           合格后，可投入使用。

回答有關(guān)基因工程的問題：（9分）
（1） 構(gòu)建基因工程表達(dá)載體時(shí)，用不同類型的限制酶切割DNA后，可能產(chǎn)生粘性末端，也可能產(chǎn)生   _   末端。若要在限制酶切割目的基因和質(zhì)粒后使其直接進(jìn)行連接，則應(yīng)選擇能使二者產(chǎn)生_____（相同，不同）粘性末端的限制酶。
（2）利用大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素時(shí)，構(gòu)建的表達(dá)載體含有人胰島素基因及其啟動(dòng)子等，其中啟動(dòng)子的作用是                                                    。在用表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌時(shí)，常用   處理大腸桿菌，以利于表達(dá)載體進(jìn)入：為了檢測胰島素基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，可用標(biāo)記的          片段作探針與mRNA雜交，該雜交技術(shù)稱為                 。為了檢測胰島素基因轉(zhuǎn)錄的mRNA是否翻譯成                _，常用抗原-抗體雜交技術(shù)。
（3）如果要將某目的基因通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入植物細(xì)胞，先要將目的基因插入農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的       _    中，然后用該農(nóng)桿菌感染植物細(xì)胞，通過DNA重組將目的基因插入植物細(xì)胞的       _上。

以重組DNA技術(shù)為核心的基因工程正在改變著人類的生活。請(qǐng)回答下列問題。
(1)獲得目的基因的方法通常包括    和   。
(2)切割和連接DNA分子所使用的酶分別是         。
(3)運(yùn)送目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體一般選用病毒或     ，后者的形狀呈     。
(4)由于重組DNA分子成功導(dǎo)入受體細(xì)胞的頻率 ，所以在轉(zhuǎn)化后通常需要進(jìn)行   操作。
(5)將人胰島素基因分別導(dǎo)入大腸桿菌與酵母菌，從兩者中生產(chǎn)的胰島素在功能和  序列上是相同的。

基因工程自20世紀(jì)70年代興起后，發(fā)展迅猛，成果顯著。
Ⅰ利用大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素時(shí)，構(gòu)建的表達(dá)載體含有人胰島素基因及其啟動(dòng)子等，其中啟動(dòng)子的作用是       ______。在用表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌時(shí)，常用            處理大腸桿菌，以利于表達(dá)載體進(jìn)入；為了檢測胰島素基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，可用標(biāo)記的胰島素基因片段作探針與mRNA雜交，該雜交技術(shù)稱為       __________   。為了檢測胰島素基因轉(zhuǎn)錄的mRNA是否翻譯成蛋白質(zhì)，常用______________________技術(shù)。
Ⅱ近10年來，PCR技術(shù)（多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）成為分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的一種常規(guī)手段，下圖為PCR原理示意圖，據(jù)圖回答問題。

（1）基因工程中，利用PCR技術(shù)來________________，PCR技術(shù)依據(jù)的原理是DNA的半保留復(fù)制，生物體內(nèi)也能完成DNA的復(fù)制，但有所不同，圖中A過程稱為____________，在生物體內(nèi)需要____________才能完成。圖中B 過程的完成需要_________等條件（3分）。
（2）若DNA樣品的長度為100個(gè)堿基對(duì)，且A占15%，則完成三次循環(huán)，共需要提供的胞嘧啶脫氧核苷酸___________個(gè)。