2．肉毒桿菌毒素并非由活著的肉毒桿菌釋放，而是先在肉毒桿菌細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生無(wú)毒的前體毒素，在肉毒桿菌死亡自落后前體毒素游離出來(lái)，經(jīng)腸道中的胰蛋白酶或細(xì)菌產(chǎn)生的蛋白酶作用后方始具有毒性．回答下列相關(guān)問(wèn)題：

（1）根據(jù)酶的專一性可推斷出肉毒桿菌毒素的本質(zhì)為蛋白質(zhì)．
（2）肉毒桿菌毒素作用的機(jī)理是阻斷神經(jīng)末梢分泌能使肌肉收縮的神經(jīng)遞質(zhì)，從而達(dá)到麻痹肌肉的效果．神經(jīng)軸突束捎經(jīng)多次分支，最后每個(gè)小枝末端膨大，呈杯狀或球狀，叫突觸小體，該結(jié)構(gòu)能與其他神經(jīng)元的細(xì)胞體和樹突等相接觸，共同形成突觸．
（3）興奮在神經(jīng)纖維上傳導(dǎo)具有雙向牲，請(qǐng)?jiān)谙聢D右側(cè)神經(jīng)纖維上繪制出膜內(nèi)卦正負(fù)電位、局部電流的方向及興奮的傳導(dǎo)方向．
．

1．如圖甲是蛙的坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本（浸在適宜培養(yǎng)液中保持活性）．在坐骨神經(jīng)上（膜外）放置兩個(gè)電極（b、c），并且將兩個(gè)電極連接到一個(gè)電表上，靜息時(shí)，電表上沒(méi)有電位差．隨后在坐骨神經(jīng)一端（a）處給予一個(gè)刺激，電表將發(fā)生一系列變化．最終表明刺激坐骨神經(jīng)時(shí)，會(huì)產(chǎn)生一個(gè)負(fù)電波，并且沿神經(jīng)傳導(dǎo)．

（1）在如圖丙中畫出b、c兩點(diǎn)的負(fù)電波圖形，并以虛線表示去極化過(guò)程，實(shí)線表示復(fù)極化過(guò)程．

（2）按圖甲的方法并不能測(cè)出靜息電位的值，若要測(cè)定，該如何處理？將電極b接在膜內(nèi)，c接在膜外；或者將b接在膜外，c接在膜內(nèi)；
如果其它條件不變，僅增加培養(yǎng)液中Na離子的濃度，則（1）題中的曲線將如何變化，請(qǐng)?jiān)谌鐖D丁中畫出．（先畫出（1）的曲線，在其邊上畫出改變濃度后的負(fù)電波，記為b₁和c₁，仍以虛線表示去極化過(guò)程，實(shí)線表示復(fù)極化過(guò)程．
（3）圖乙神經(jīng)纖維A處和B處的離子變化情況分別是什么？
A處鉀離子外流；B處鈉離子內(nèi)流；
（4）圖乙所示興奮的傳播方式稱為什么傳導(dǎo)；有什么特點(diǎn)：不衰減性；絕緣性；（答出兩點(diǎn)）

18．由于人突變細(xì)胞中含胸苷激酶（TK）而缺乏HGPRT酶，小鼠正常細(xì)胞中含HGPRT酶而缺乏TK，兩種細(xì)胞均不能在HAT培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，但可在普通培養(yǎng)基中生長(zhǎng)．利用上述兩類細(xì)胞融合獲得雜種細(xì)胞，在雜種細(xì)胞傳代過(guò)程中，鼠的染色體被保留下來(lái)，人的染色體隨機(jī)丟失，以至最后只剩一條或幾條人染色體（如圖，圖中數(shù)字代表保留的人染色體編號(hào)）．科研人員運(yùn)用這一方法確定了胸苷激酶基因所在的染色體．分析回答：

（1）與植物原生質(zhì)融合過(guò)程相比，過(guò)程A特有的誘導(dǎo)方法是用滅活的病毒處理．
（2）動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素的目的是防止雜菌污染，培養(yǎng)箱中充入5…的CO₂氣體的主要作用是維持培養(yǎng)液適宜的pH．
（3）若細(xì)胞兩兩融合，則會(huì)出現(xiàn)3種類型的融合細(xì)胞，過(guò)程B用HAT培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，其目的是篩選出人鼠融合細(xì)胞（或“雜種細(xì)胞”）．
（4）為了使人的全部染色體分別包含于各種不同的人鼠雜交細(xì)胞中，人鼠融合細(xì)胞應(yīng)在普通（填“HAT”或“普通”）培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)．為檢查雜種細(xì)胞中含有的人染色體數(shù)目和形態(tài)，最好選取有絲分裂中期（時(shí)期）的雜種細(xì)胞進(jìn)行觀察．
（5）若將某次實(shí)驗(yàn)獲得的各種人鼠雜種細(xì)胞分別在HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)，一段時(shí)間后，發(fā)現(xiàn)在HAT培養(yǎng)基中只有A、B、C三種雜種細(xì)胞能夠生長(zhǎng)，檢查雜種細(xì)胞中保留的人染色=體情況如下表（表中“+”表示有相應(yīng)染色體，“-”表示無(wú)相應(yīng)染色體）：

雜種細(xì)胞	保留的人染色體
	2號(hào)	3號(hào)	5號(hào)	9號(hào)	12號(hào)	17號(hào)	21號(hào)
A	+	+	+	+	-	+	-
B	-	+	-	-	+	+	-
C	+	-	+	-	+	+	+

根據(jù)表中信息，可推測(cè)人細(xì)胞中胸苷激酶基因位于17號(hào)染色體上．

17．如圖是生物興趣小組為研究“某品牌酸奶中乳酸菌種類及其耐藥情況”而制定的流程圖．請(qǐng)分析回答：

（1）與酵母菌相比，乳酸菌在結(jié)構(gòu)上的主要區(qū)別是細(xì)胞內(nèi)沒(méi)有核膜包被的細(xì)胞核（或“沒(méi)有核膜”）．
（2）本研究使用的細(xì)菌培養(yǎng)基中特別加入了一定量的碳酸鈣，乳酸菌在無(wú)氧呼吸（生理過(guò)程）中產(chǎn)生的乳酸能與不溶性的碳酸鈣反應(yīng)生成可溶性的乳酸鈣，從而在菌落周圍形成溶鈣圈．從物理形態(tài)分析，本研究使用的培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基（類型）．
（3）在利用高壓蒸汽滅菌鍋對(duì)培養(yǎng)基滅菌時(shí)，鍋內(nèi)水加熱煮沸后，必須將鍋內(nèi)冷空氣徹底排除，以保證鍋內(nèi)氣壓上升至100kPa，達(dá)到l21℃．滅菌后的培養(yǎng)基應(yīng)適當(dāng)冷卻后，在酒精燈火焰附近倒平板．
（4）請(qǐng)完善“檢測(cè)乳酸菌對(duì)青霉素、四環(huán)素耐藥性”實(shí)驗(yàn)操作步驟：
步驟1：分別取等量的青霉素、四環(huán)素和無(wú)菌水加入三組無(wú)菌培養(yǎng)皿中，再加入滅菌并已經(jīng)冷卻到 50℃左右的培養(yǎng)基，立即混勻，靜置凝固成平板．
步驟2：向三組培養(yǎng)基中分別接種待檢測(cè)的乳酸菌菌種．
步驟3：將接種后的三組培養(yǎng)基和一個(gè)未接種的培養(yǎng)基都置于適宜溫度等條件下培養(yǎng)若干天，觀察比較培養(yǎng)基中菌落生長(zhǎng)情況．

16．γ-氨基丁酸（GABA）是具有降血壓、抗焦慮等功能的水溶性氨基酸．科研人員通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究了白方腐乳在前發(fā)酵、鹽腌和后發(fā)酵過(guò)程中GABA的含量變化，為尋找生產(chǎn)富含GABA腐乳的工藝奠定基礎(chǔ)．實(shí)驗(yàn)步驟如下：

①豆腐白坯表面接種毛霉孢子后，在適宜的溫度和濕度下培養(yǎng)48h，獲得毛坯．
②將毛坯分層整齊地?cái)[放在瓶中，鹽腌5d．
③腌制后加入鹵湯，置于28℃恒溫箱中后發(fā)酵90d．
④分別采集各時(shí)段的腐乳坯樣品，測(cè)定GABA含量，結(jié)果如下．
請(qǐng)分析回答：
（1）毛霉生長(zhǎng)的適宜溫度為15～18℃．
（2）前發(fā)酵過(guò)程中，毛坯的GABA含量發(fā)生明顯變化的原因是毛霉產(chǎn)生的蛋白酶促進(jìn)豆腐中的蛋白質(zhì)水解產(chǎn)生GABA．
（3）步驟②中，加鹽腌制的正確方法是：逐層加鹽，隨著層數(shù)的加高鹽量應(yīng)增加，使其自然含鹽量平均為16%．此過(guò)程腐乳干重中的GABA含量下降，一方面一食鹽抑制毛霉生長(zhǎng)，酶活性降低有關(guān)；另一方面部分GABA會(huì)溶解于水（不存在于腐乳塊中）而導(dǎo)致測(cè)定值減�。�
（4）后發(fā)酵過(guò)程中，GABA含量再次增加的原因是（毛霉產(chǎn)生的）蛋白酶繼續(xù)發(fā)揮作用，后發(fā)酵60d后的白方腐乳出廠銷售比較適宜．

15．1963年諾和諾德公司向洗滌劑中加入堿性蛋白酶，推出了第一款加酶洗衣粉．堿性蛋白酶一般利用枯草芽孢桿菌生產(chǎn)．圖甲、乙為某科研小組對(duì)堿性蛋白酶相關(guān)性質(zhì)進(jìn)行測(cè)試的結(jié)果．圖丙、丁為兩種常見(jiàn)的平板劃線法；連續(xù)劃線法和四區(qū)劃線法，前者適用于純化菌種較少的樣品，后者適用于純化菌種較多的樣品．請(qǐng)回答下列問(wèn)題：
（1）由圖甲、乙可知，堿性蛋白酶發(fā)揮作用的適宜條件為pH為10.2左右和43℃左右的溫度．
（2）圖丁中依次進(jìn)行四區(qū)劃線，四區(qū)的面積要求為C＜D＜E＜F，F(xiàn)區(qū)面積最大的原因是使該區(qū)出現(xiàn)大量的單菌落以供挑選純種用（或便于菌種分散）．每次劃線后都要灼燒接種環(huán)，注意F區(qū)劃線不要與C（填字母）區(qū)相連．
（3）某興趣小組欲從土壤中分離枯草芽孢桿菌，宜選擇圖丁所示的方法劃線培養(yǎng)，分離得到的純化單菌落屬于種群（填“種群”或“群落”）．
（4）堿性蛋白酶是枯草芽孢桿菌生長(zhǎng)后期向細(xì)胞外分泌的一種酶，與該酶合成有關(guān)的細(xì)胞器是核糖體．若欲應(yīng)用固定化技術(shù)提高該酶的利用率，減少產(chǎn)物中的雜質(zhì)，則應(yīng)采用化學(xué)結(jié)合或物理吸附法方法．

14．下表中列出了幾種限制酶識(shí)別程序及其切割位點(diǎn)，圖一、圖二中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)．


（1）若圖二中目的基因D是人的α-抗胰蛋白酶的基因，現(xiàn)在要培養(yǎng)乳汁中含α-抗胰蛋白酶的羊，科學(xué)家要將該基因注射到羊的受精卵中，則發(fā)育成的羊能分泌含α-抗胰蛋白酶的乳汁．
（2）限制酶SmaⅠ和限制酶XmaⅠ作用的不同點(diǎn)是切割位點(diǎn)不同．
（3）圖二中的目的基因D需要同時(shí)使用限制酶MseⅠ和限制酶PstⅠ才能獲取，而圖一所示的質(zhì)粒無(wú)相應(yīng)的限制酶切位點(diǎn)．所以在用該質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，需要對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行改造，構(gòu)建新的限制酶切位點(diǎn)．試寫出構(gòu)建需要的限制酶切位點(diǎn)的過(guò)程（提供構(gòu)建需要的所有條件）：
①首先用EcoRⅠ酶處理質(zhì)粒；
②然后用DNA聚合酶處理質(zhì)粒，使被切開(kāi)的質(zhì)量末端鏈接上相應(yīng)的脫氧核苷酸
③再運(yùn)用DNA連接酶處理質(zhì)粒，形成新的限制酶切位點(diǎn)，即可被限制酶MseⅠ識(shí)別．
（4）基因工程中的篩選是一個(gè)重要的步驟．如圖表示運(yùn)用影印培養(yǎng)法（使在一系列培養(yǎng)皿的相同位置上能出現(xiàn)相同菌落的一種培養(yǎng)方法）檢測(cè)基因表達(dá)載體是否導(dǎo)入大腸桿菌．培養(yǎng)基除了含有細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖必需的成分外，培養(yǎng)基A和培養(yǎng)基B分別還含有四環(huán)素、青霉素．從檢測(cè)篩選的結(jié)果分析，含有目的基因的是4和6菌落中的細(xì)菌．

13．下列與果酒、果醋和腐乳制作相關(guān)的敘述，錯(cuò)誤的是（　　）

	A．	腐乳制作所需要的適宜溫度最高
	B．	果醋發(fā)酵包括無(wú)氧發(fā)酵和有氧發(fā)酵
	C．	菌種均可來(lái)自于自然環(huán)境、接種純凈的菌種則品質(zhì)更佳
	D．	使用的菌種都具有細(xì)胞壁、核糖體、DNA和RNA

12．植物體細(xì)胞雜交與動(dòng)物細(xì)胞工程中所用技術(shù)與原理相符的是（　�。�

	A．	植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)-細(xì)胞的全能性
	B．	纖維素酶、果膠酶處理和胰蛋白酶處理-酶的專一性
	C．	原生質(zhì)體融合和動(dòng)物細(xì)胞融合-細(xì)胞膜的流動(dòng)性
	D．	紫草細(xì)胞培養(yǎng)和雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)-細(xì)胞增殖

11．下列關(guān)于生物工程的敘述，錯(cuò)誤的是（　�。�

	A．	目前的基因?qū)�入植物�?xì)胞的常用方法是顯微注射法
	B．	植物的單倍體育種和植物基因工程育種都必須利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)
	C．	脫毒苗是利用基因工程技術(shù)將脫毒基因?qū)�入植物�?xì)胞培養(yǎng)成的新品種
	D．	蛋白質(zhì)工程也需要構(gòu)建含控制預(yù)期蛋白質(zhì)合成的基因表達(dá)載體