Question

【題目】下表中列出了幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)，圖1、圖2中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

(1)若圖2中目的基因D是人的α-抗胰蛋白酶的基因，現(xiàn)在要培養(yǎng)乳汁中含α-抗胰蛋白酶的羊，研究者需將該基因通過(guò) （方法）注入到羊的 中，則發(fā)育成的羊有可能分泌含α-抗胰蛋白酶的乳汁。這一過(guò)程涉及到以下哪些過(guò)程（多選） 。

A．DNA自我復(fù)制B．DNA以其一條鏈為模板合成RNA

C．RNA自我復(fù)制D．按照RNA上密碼子的排列順序合成蛋白質(zhì)

(2)若圖2中目的基因D需要同時(shí)使用MetⅠ和PstⅠ才能獲得，而圖1所示的質(zhì)粒無(wú)相應(yīng)的限制酶酶切位點(diǎn)。所以在該質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，需要對(duì)質(zhì)粒改造，構(gòu)建新的限制酶酶切位點(diǎn)。試幫助完成構(gòu)建需要的限制酶酶切位點(diǎn)的思路（選填①-⑤）：

①EcoRⅠ②MetⅠ③PstⅠ④DNA連接酶⑤DNA聚合酶

首先用 處理質(zhì)粒；然后用 處理質(zhì)粒，使被切開(kāi)的質(zhì)粒末端連接上相應(yīng)的脫氧核苷酸；再用 處理質(zhì)粒，形成了的限制酶酶切割位點(diǎn)，它可被②識(shí)別。

(3)檢測(cè)篩選是一個(gè)重要步驟。圖3表示在一系列培養(yǎng)皿的相同位置上能出現(xiàn)相同菌落的一種接種方法與培養(yǎng)方法，以檢測(cè)基因表達(dá)載體是否導(dǎo)入大腸桿菌。培養(yǎng)基除了含有細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖必需的成分外，培養(yǎng)基A和培養(yǎng)基B分別還含有 、 。從篩選結(jié)果分析，含目的基因的是 （填編號(hào)）菌落中的細(xì)菌。

⑷DNA分子中，一條鏈的兩個(gè)核苷酸通過(guò) 連接。如要檢測(cè)目的基因是否成功表達(dá)，須提取培養(yǎng)后大腸桿菌解的 ，用相應(yīng)抗體檢測(cè)。

Answer 1

【答案】（1）顯微注射 受精卵 ABD

（2）①⑤④②

（3）四環(huán)素 青霉素 4、6

（4）磷酸二酯鍵 總蛋白

【解析】（1）基因工程中，一般采取顯微注射法將含有目的基因的重組質(zhì)粒導(dǎo)入受精卵細(xì)胞中，然后將該受精卵發(fā)育成具有目的基因的個(gè)體。在受精卵發(fā)育成個(gè)體的過(guò)程中涉及到細(xì)胞分裂和細(xì)胞分化，會(huì)發(fā)生DNA的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄形成RNA，翻譯成蛋白質(zhì)，但是不會(huì)發(fā)生RNA的復(fù)制，故選ABD。

（2）根據(jù)題干信息和圖像分析，對(duì)質(zhì)粒改造，構(gòu)建新的限制酶酶切位點(diǎn)時(shí)，首先用①EcoRⅠ處理質(zhì)粒；然后用⑤DNA聚合酶處理質(zhì)粒，使被切開(kāi)的質(zhì)粒末端連接上相應(yīng)的脫氧核苷酸；再用④DNA連接酶處理質(zhì)粒，形成了的限制酶酶切割位點(diǎn)，它可被②MetⅠ識(shí)別。

（3）培養(yǎng)基除了含有細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖必需的成分外，培養(yǎng)基A和培養(yǎng)基B分別還含有四環(huán)素和青霉素。從圖3篩選結(jié)果分析，培養(yǎng)基B中少了4、6菌落，所以含目的基因的是4、6菌落中的細(xì)菌。

（4）DNA分子中，一條鏈的兩個(gè)核苷酸之間是通過(guò)磷酸二酯鍵連接的。如要檢測(cè)目的基因是否成功表達(dá)，須提取培養(yǎng)后大腸桿菌解的總蛋白，用相應(yīng)抗體檢測(cè)。