Question

15．草甘膦是一種非選擇性、無殘留滅生性除草劑．科學家從土壤農桿菌變種CP4中分離到抗草甘膦酶的基因，并轉移到無抗草甘膦的大豆中，從而得到新的大豆品種．請回答：
（1）在構建目的基因表達載體時，需用同種限制性核酸內切酶對含編碼抗草甘膦酶基因的DNA和運載體進行酶切．
（2）基因表達載體除了帶有抗草甘膦酶的基因以外，還必須含有啟動子、終止子和標記基因等．
（3）請寫出兩種檢測目的基因是否表達的方法：抗原-抗體雜交法和噴施草甘膦溶液．
（4）在檢測進口大豆是否為轉基因產品時，可用核酸探針進行檢測．核酸探針可以用PCR技術進行基因克隆，此克隆過程是利用DNA復制的原理，利用該技術的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，需加入的酶是耐高溫的DNA聚合（Taq）酶．

Answer 1

分析 基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）構建基因表達載體時，需用同種限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和運載體，其次需要用DNA連接酶將目的基因與運載體連接形成重組DNA．
（2）基因表達載體的組成包括目的基因（抗草甘膦酶的基因）、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）檢測目的基因是否表達的方法：從分子水平上檢測，可采用抗原-抗體雜交法；從個體水平上鑒定，可噴施草甘膦溶液，觀察大豆的生存情況．
（4）基因克隆屬于分子水平的克隆，可采用PCR技術，其原理是DNA復制；采用PCR技術擴增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列；PCR技術中有高溫變性過程，因此需加入的酶是耐高溫的DNA聚合（Taq）酶．
故答案為：
（1）限制性核酸內切      
（2）標記基因       
（3）抗原-抗體雜交法     噴施草甘膦溶液
（4）PCR     DNA復制    要有一段已知目的基因的核苷酸序列     耐高溫的DNA聚合（Taq）酶

點評 本題考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理、操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)；識記PCR技術的概念、原理、條件及過程，能結合所學的知識準確答題．