Question

【題目】現(xiàn)代生物技術(shù)

圖示三種質(zhì)粒和一個(gè)含目的基因的DNA片段示意圖。圖中Ap為氨芐青霉素抗性基因，lacZ為顯色基因。有該基因，菌落呈現(xiàn)藍(lán)色；反之，菌落呈現(xiàn)白色。EcoRⅠ、PvuⅠ為限制酶。

（1）目的基因可以用限制酶切割或________的方法獲得。在片段D中，限制酶的作用部位是____（用序號(hào)表示）。

（2）圖中能作為目的基因運(yùn)載體的最理想的質(zhì)粒是_____（A/B/C），其他兩種質(zhì)粒（一般）不能作為運(yùn)載體的理由分別是________、_________________________。

（3）若目的基因與最理想質(zhì)粒已重組并被導(dǎo)入細(xì)菌。為篩選重組質(zhì)粒的受體菌，至少應(yīng)在通用培養(yǎng)基中加入_____，培養(yǎng)一段時(shí)間后，應(yīng)挑選出_______ 色的菌落作進(jìn)一步培養(yǎng)。隨著科技進(jìn)步，細(xì)胞工程技術(shù)被廣泛運(yùn)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、藥物研發(fā)等領(lǐng)域。如：人感染埃博拉病毒（EV）會(huì)引起致命的出血熱，可使用單克隆抗體進(jìn)行有效治療。

（4）EV表面的糖蛋白（EV﹣GP）作為抗原能刺激人體產(chǎn)生____性免疫反應(yīng)。研究人員采集了多年前感染EV的康復(fù)者的血液，分離其中的a細(xì)胞制備單克隆抗體，a細(xì)胞是______。

A. 漿細(xì)胞 B. 記憶B細(xì)胞 C.致敏T細(xì)胞 D. 記憶T細(xì)胞

（5）研究發(fā)現(xiàn)：EV﹣GP具有多個(gè)與抗體結(jié)合的位點(diǎn)，我國(guó)科學(xué)工作者用分子結(jié)構(gòu)成像技術(shù)證實(shí)了多種抗體的存在、且與EV﹣GP結(jié)合位點(diǎn)不同的事實(shí)�；�于題中信息，請(qǐng)?zhí)岢鰞煞N更有效治療EV病毒患者的思路_______。

Answer 1

【答案】化學(xué)方法人工合成 ② B 質(zhì)粒A缺少標(biāo)記基因 質(zhì)粒C的復(fù)制原點(diǎn)可能被限制酶切割，影響重組質(zhì)粒的復(fù)制 氨芐青霉素 白色 特異性免疫 B 針對(duì)EV﹣GP與抗體結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)構(gòu)研制新型藥物；選擇不同結(jié)合位點(diǎn)的多種藥物聯(lián)合使用；利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)生產(chǎn)更高效藥物治療；利用單抗克隆技術(shù)制備療效更好的藥物

【解析】

基因工程的工具包括：限制酶、DNA連接酶和運(yùn)載體。

基因工程的操作步驟：獲取目的基因（基因文庫(kù)、PCR、人工合成）；構(gòu)建基因表達(dá)載體（含標(biāo)記基因、啟動(dòng)子、終止子、目的基因、復(fù)制原點(diǎn)等）；把目的基因?qū)�入受體細(xì)胞（顯微注射法、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法、花粉管通道法、鈣離子處理法）；目的基因的檢測(cè)和鑒定（分子水平和個(gè)體水平檢測(cè)，前者包括DNA分子雜交、分子雜交和抗原抗體雜交；后者如抗蟲抗病接種實(shí)驗(yàn)）。

（1）獲取目的基因，可以用限制酶切割或化學(xué)方法人工合成的方法。限制酶的作用部位是磷酸二酯鍵，對(duì)應(yīng)片段D中，限制酶的②部位。

（2）圖中質(zhì)粒A缺少標(biāo)記基因；質(zhì)粒C的復(fù)制原點(diǎn)可能被限制酶切割，影響重組質(zhì)粒的復(fù)制，故常選擇質(zhì)粒B作為目的基因運(yùn)載體的最理想的質(zhì)粒。

（3）由圖可知，質(zhì)粒B與目的基因連接后，會(huì)破壞lacZ基因，標(biāo)記基因Ap完整，故可以在培養(yǎng)基中加入氨芐青霉素來(lái)篩選重組質(zhì)粒的受體菌，含重組質(zhì)�；蛸|(zhì)粒B的受體菌可以存活，培養(yǎng)一段時(shí)間后，由于含重組載體的受體菌不含lacZ基因，故呈白色，故應(yīng)挑選出白色的菌落作進(jìn)一步培養(yǎng)。

（4）EV表面的糖蛋白（EV﹣GP）作為抗原能刺激人體產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng)，包括體液免疫和細(xì)胞免疫。由于細(xì)胞a是由多年前感染EV的康復(fù)者的血液中提取的，該康復(fù)者體內(nèi)已經(jīng)沒(méi)有漿細(xì)胞，致敏T細(xì)胞、記憶T細(xì)胞不能分泌抗體；故細(xì)胞a可能是記憶B細(xì)胞，該細(xì)胞可以增殖分化產(chǎn)生漿細(xì)胞，漿細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合經(jīng)過(guò)篩選后，可以獲得單克隆抗體。故選B。

（5）由題意可知，可以針對(duì)EV﹣GP與抗體結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)構(gòu)研制新型藥物來(lái)消滅EV病毒；也可以選擇不同結(jié)合位點(diǎn)的多種藥物聯(lián)合使用消滅EV病毒，治療EV病毒患者。