Question

16．下面是對大腸桿菌進行數(shù)量測定的實驗，請回答有關(guān)問題．
（1）制備稀釋倍數(shù)為10²、10³、10⁴、10⁵、10⁶的系列稀釋液．
（2）為了得到更加準(zhǔn)確的結(jié)果，選用適宜的方法接種樣品：右圖是利用平板劃線法 法進行微生物接種，把聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面，為達到這一目的，操作上應(yīng)注意第二次及以后的每次劃線前要灼燒接種環(huán)，冷卻后從上一區(qū)劃線末端開始化，首尾區(qū)的劃線不能相接．
（3）適宜溫度下培養(yǎng)．結(jié)果分析：
①一同學(xué)在稀釋倍數(shù)為10⁵的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數(shù)的平均值為32.4個，那么每毫升樣品中的細菌數(shù)是（接種時所用稀釋液的體積為0.1mL）3.24×10⁷ 個．
②用這種方法測得的數(shù)量比實際活菌數(shù)量要少，因為當(dāng)兩個或多個細胞連在一起時平板上觀察的是一個菌落．
（4）在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，操作者的雙手需要進行清洗和消毒；已滅菌的材料用具應(yīng)避免與周圍物品接觸．
（5）培養(yǎng)大腸桿菌時，在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染．對于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測方法是將未接種微生物的培養(yǎng)基在適宜的條件下放置一段時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生．

Answer 1

分析 1、平板劃線法是接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的造作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面，在數(shù)次劃線之后培養(yǎng)，可以分離到由一個細胞繁殖而來的子細胞群體-菌落；為了得到由一個細胞繁殖而來的菌落，劃線時應(yīng)注意：第二次及以后的每次劃線前要灼燒接種環(huán)，冷卻后從上一區(qū)劃線末端開始化，首尾區(qū)的劃線不能相接．
2、對微生物進行分離、計數(shù)常用的接種方法是稀釋涂布平板法，估算每毫升樣品中的細菌數(shù)時，往往選取30～300的平板，取三個平板的平均值，每毫升樣品中的細菌數(shù)=（平板的平均菌落數(shù)÷涂布的體積）×稀釋的倍數(shù)；由于當(dāng)兩個或多個細胞連在一起時平板上觀察的是一個菌落，因此估算的菌落數(shù)少于實際菌落數(shù)．
3、微生物培養(yǎng)過程中要嚴(yán)格遵循無菌操作．

解答 解：（2）分析題圖可知，該圖顯示的接種方法是平板劃線法；為了得到由一個細胞繁殖而來的菌落，劃線時應(yīng)注意：第二次及以后的每次劃線前要灼燒接種環(huán)，冷卻后從上一區(qū)劃線末端開始化，首尾區(qū)的劃線不能相接．
（3）①每毫升樣品中的細菌數(shù)是═（平板的平均菌落數(shù)÷涂布的體積）×稀釋的倍數(shù)=（32.4÷0.1）×10⁵=3.24×10⁷個．
②由于當(dāng)兩個或多個細胞連在一起時平板上觀察的是一個菌落，因此估算的菌落數(shù)少于實際菌落數(shù)．
（4）在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，操作者的雙手需要進行清洗和消毒；已滅菌的材料用具應(yīng)避免與周圍物品接觸．
（5）將未接種微生物的培養(yǎng)基在適宜的條件下放置一段時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生來判斷培養(yǎng)基是否被污染，如果為接種微生物的培養(yǎng)基有菌落生長，說明培養(yǎng)基被污染，否則，沒有被污染．
故答案為：
（2）平板劃線法    第二次及以后的每次劃線前要灼燒接種環(huán)，冷卻后從上一區(qū)劃線末端開始化，首尾區(qū)的劃線不能相接
（3）①3.24×10⁷ ②少   當(dāng)兩個或多個細胞連在一起時平板上觀察的是一個菌落
（4）消毒   與周圍物品接觸
（5）將未接種微生物的培養(yǎng)基在適宜的條件下放置一段時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生

點評 本題旨在考查學(xué)生對微生物實驗室培養(yǎng)技術(shù)的熟練掌握并應(yīng)用相關(guān)知識解決實際問題的能力．