Question

20．Rag₂基因缺失小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細胞．科研人員利用胚胎干細胞（ES細胞）對Rag₂基因缺失小鼠進行基因治療．其技術(shù)流程如圖：

（1）步驟①中，在核移植前應(yīng)去除卵母細胞的細胞核．
（2）步驟②中，重組胚胎培養(yǎng)到囊胚期時，可從其內(nèi)細胞團分離出ES細胞．
（3）步驟③中，需要構(gòu)建含有基因Rag₂的表達載體．可以根據(jù)基因Rag₂的核苷酸序列設(shè)計引物，利用PCR技術(shù)擴增Rag₂基因片段．用HindⅢ和PstⅠ限制酶分別在片段兩側(cè)進行酶切獲得Rag₂基因片段．為將該片段直接連接到表達載體，所選擇的表達載體上應(yīng)具有Hindlll和PstI酶的酶切位點．
（4）步驟④在特定的誘導下ES細胞成功分化為造血干細胞其原因是選擇性表達的結(jié)果．
（5）為檢測Rag₂基因的表達情況，可提取治療后小鼠骨髓細胞的蛋白質(zhì)，用Rag₂蛋白的抗體進行雜交實驗．

Answer 1

分析 分析題圖：①表示核移植過程；②表示早期胚胎培養(yǎng)過程；③表示將目的基因?qū)�入ES細胞．④體外誘導ES細胞分裂分化造血干細胞，然后進行造血干細胞移植．

解答 解：（1）核移植是將體細胞核移植到去核的卵母細胞中，所以實驗前要去除卵母細胞的細胞核．
（2）步驟②中，重組胚胎培養(yǎng)到囊胚期，可從其內(nèi)細胞團分離出ES細胞．
（3）步驟③是將目的基因?qū)�入ES細胞，該過程之前需要構(gòu)建基因表達載體；可以根據(jù)基因Rag₂的核苷酸序列設(shè)計引物，利用PCR技術(shù)擴增Rag₂基因片段．用HindⅢ和PstⅠ限制酶分別在片段兩側(cè)進行酶切獲得Rag₂基因片段．為將該片段直接連接到表達載體，所選擇的表達載體上應(yīng)具有Hindlll和Pst I酶的酶切位點．
（4）步驟④在特定的誘導下ES細胞成功分化為造血干細胞，而分化的實質(zhì)是基因的選擇性表達．
（5）為檢測Rag₂基因是否表達，可以采用抗原-抗體（Rag₂蛋白）雜交法．
故答案為：
（1）細胞核
（2）囊胚 內(nèi)細胞團
（3）核苷酸序列   Hindlll和Pst I
（4）選擇性表達
（5）蛋白質(zhì)

點評 本題以基因治療的流程圖為載體，考查了基因工程、細胞工程以及胚胎工程等方面的知識，難度適中．考生要能夠識記細胞核移植的過程；識記囊胚包括內(nèi)細胞團和滋養(yǎng)層兩部分；明確基因工程中質(zhì)粒和目的基因需要利用同種限制酶進行切割；掌握目的基因檢測和鑒定的一般方法等．