Question

紅細胞含有大量的血紅蛋白，紅細胞的機能主要是由血紅蛋白完成，血紅蛋白的主要功能是攜帶氧氣或二氧化碳，我們可以選用豬、牛、羊或其他脊椎動物的血液進行實驗，來提取和分離血紅蛋白，請回答下列有關問題：
（1）血紅蛋白提取和分離的程度可分為四步：

 

、

 

、

 

和純度鑒定．
（2）實驗前取新鮮的血液，要切記在采血容器中預先加入檸檬酸鈉，取血回來，馬上進行離心，收集血紅蛋白溶液．分離血紅蛋白溶液時，將混合液離心后可看到試管中的液體分為4層：第一層為無色透明的

 

，第二層為

 

白色薄層固體，是物質的沉淀層，第三層是紅色透明液體，是

 

的水溶液，第四層是其他雜質的暗紅色沉淀物．
（3）收集的血紅蛋白溶液在透析袋中可以經(jīng)過透析，這就是樣品的粗分離．
①透析的目的是

 

．②透析的原理是

 

．
（4）然后通過凝膠色譜法將樣品進一步純化，最后經(jīng)SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳進行純度鑒定．
下面是凝膠色譜法分離血紅蛋白時樣品的加入（圖I）和洗脫（圖Ⅱ）示意圖，請據(jù)圖回答下列問題．
a．在加樣示意圖中，正確的加樣順序是

 

．
b．用吸管加樣時，應注意正確操作，分別是①待緩沖液降到與凝膠面齊平再加樣．②貼著管壁加樣

 

．
c．等樣品完全進入凝膠后，才加入緩沖液洗脫．待

 

接近色譜柱底端時，用試管收集流出液，每5mL收集一管，連續(xù)收集．
①品純化目的是

 

．
②血紅蛋白呈現(xiàn)紅色，這一特點對進行蛋白質的分離有什么意義？

 

．

Answer 1

考點：蛋白質的提取和分離

專題：

分析：血紅蛋白的提取與分離的實驗步驟主要有：
（1）樣品處理：①紅細胞的洗滌（低速短時間離心），②血紅蛋白的釋放（需要加入蒸餾水和甲苯），③分離血紅蛋白（中速長時間離心）．
（2）粗分離：①分離血紅蛋白溶液，②透析．
（3）純化：調(diào)節(jié)緩沖液面→加入蛋白質樣品→調(diào)節(jié)緩沖液面→洗脫→收集分裝蛋白質．
（4）純度鑒定--SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳．

解答： 解：（1）血紅蛋白提取和分離步驟：樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定．
（2）分離血紅蛋白溶液時，將混合液離心后可看到試管中的液體分為4層：第一層為無色透明的甲苯層，第二層為脂溶性物質的白色薄層固體，是物質的沉淀層，第三層是紅色透明液體，是血紅蛋白的水溶液，第四層是其他雜質的暗紅色沉淀物．
（3）透析袋能使小分子自由進出，而大分子則保留在袋內(nèi)，因此透析可以去除相對分子質量較小的雜質．
（4）a．加樣和洗脫的具體過程為：調(diào)節(jié)緩沖液面→加入蛋白質樣品→調(diào)節(jié)緩沖液面→洗脫→收集分裝蛋白質，因此正確的加樣順序是②①④③．
b．用吸管加樣時，應注意正確操作，分別是：①待緩沖液降到與凝膠面齊平再加樣．②貼著管壁加樣，不要破壞凝膠面．
c．①品純化目的是通過凝膠色譜法將相對分子質量大的雜質蛋白除去．
②血紅蛋白呈現(xiàn)紅色，因此可以通過觀察顏色來判斷什么時候應該收集洗脫液，這也使血紅蛋白的分離過程非常直觀，大大簡化了實驗操作．
故答案為：
（1）樣品處理；粗分離；純化；純度鑒定
（2）甲苯層；脂溶性物質；血紅蛋白；
（3）①去除分子質量較小的雜質②透析袋能使小分子自由進出，而大分子則保留在袋內(nèi)
（4）a、②①④③b、③不要破壞凝膠面  c、紅色蛋白質
①通過凝膠色譜法將相對分子質量大的雜質蛋白除去
②可以通過觀察顏色來判斷什么時候應該收集洗脫液；這使血紅蛋白的分離過程非常直觀，大大簡化了實驗操作．

點評：本題結合圖解，考查蛋白質的提取和分離，對于此類試題，需要考生注意的細節(jié)較多，如實驗的原理、實驗步驟，實驗采用的試劑及試劑的作用，能結合所學的知識準確答題，屬于考綱識記和理解層次的考查．