Question

12．臨床使用抗生素前，有時需要做細菌耐藥實驗．實驗時，首先要從病人身上獲取少量樣本，然后按照一定的實驗步驟操作，以確定某致病菌對不同抗生素的敏感性．回答下列問題：
（1）為統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目，常將樣品用稀釋涂布法接種于培養(yǎng)基表面．運用活菌計數(shù)法統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低，原因是當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落．
（2）為了檢驗該致病菌對于抗生素的敏感性，在該病菌菌落均勻生長的平板的不同位置，分別放置含有A、B、C、D四種抗生素的濾紙片，培養(yǎng)一段時間后，在四個濾紙片周圍出現(xiàn)透明圈由大到小依次是A＞C＞D＞B，由此推斷，該病人目前適合使用的抗生素A．含C的濾紙片周圍透明圈比含A的小，說明該病人該致病菌對C的敏感性比對A的弱；若抗生素B的濾紙片周圍沒有出現(xiàn)透明圈，最可能的原因是長期服用抗生素B導致的結(jié)果；含D的濾紙片周圍的透明圈也比含A的小，且透明圈中出現(xiàn)一個菌落，這種菌落的出現(xiàn)可能是由于接種過程不嚴格導致的，也可能是產(chǎn)生了抗生素D的耐藥菌，這種變異的特點是隨機的、不定向的（普遍性、頻率很低等其他答案也可以）（至少列舉兩個）．
（3）實驗中培養(yǎng)基需用高壓蒸汽滅菌、接種環(huán)用灼燒滅菌、接種過程也在酒精燈火焰旁進行，其達到的目的是防止外來微生物的污染．

Answer 1

分析 1、微生物常見的接種的方法
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落．
2、無菌技術(shù)：消毒和滅菌

	消毒	滅菌
概念	使用較為溫和的物理或化學方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物（不包芽孢和孢子）	使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所用的微生物（包括芽孢和孢子）
常用方法	煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學藥劑消毒法、紫外線消毒法	灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌
適用對象	操作空間、某些液體、雙手等	接種環(huán)、接種針、玻璃器皿、培養(yǎng)基等

解答 解：（1）接種微生物常用稀釋涂布平板法和平板劃線法，其中稀釋涂布平板法能統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目；用該方法計數(shù)時，當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落，因此統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低． 
（2）透明圈由大到小依次是A＞C＞D＞B，可見抗生素A的作用效果最好，因此該病人目前適合使用抗生素A．對抗生素越敏感，形成的透明圈越大，若含C的濾紙片周圍透明圈比含A的小，說明該致病菌對C的敏感性比對A的弱；若抗生素B的濾紙片周圍沒有出現(xiàn)透明圈，最可能的原因是長期服用抗生素B導致的結(jié)果；含D的濾紙片周圍的透明圈也比含A的小，且透明圈中出現(xiàn)一個菌落，這種菌落的出現(xiàn)可能是由于接種過程不嚴格導致的，也可能是產(chǎn)生了抗生素D的耐藥菌，其形成的根本原因是基因突變，其特點是普遍性、隨機性、不定向性、低頻性等．
（3）實驗中培養(yǎng)基需用高壓蒸汽滅菌、接種環(huán)用灼燒滅菌、接種過程也在酒精燈火焰旁進行，其達到的目的是防止外來微生物的污染．
故答案為：
（1）稀釋涂布     當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落
（2）A    該致病菌對C的敏感性比對A的弱    長期服用抗生素B       隨機的、不定向的
（3）高壓蒸汽      防止外來微生物的污染

點評 本題考查微生物分離和培養(yǎng)，要求考生識記接種微生物常用的兩種方法；識記無菌技術(shù)及實例；識記微生物的計數(shù)方法，能結(jié)合所學的知識準確答題．