Question

【題目】油輪泄漏會(huì)造成嚴(yán)重的環(huán)境污染，吸油菌可將原油分解為無(wú)機(jī)物，從而消除原油泄漏造成的海水污染。某科研小組欲篩選分離能高效降解海水中原油的菌株進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)操作，回答下列問(wèn)題。

（1）采集樣品與選擇培養(yǎng)：從___中采集樣品；然后將樣品適當(dāng)稀釋后接種于液體培養(yǎng)基中富集，從培養(yǎng)基的成分來(lái)看，應(yīng)以 ___為碳源，從培養(yǎng)基的理化性質(zhì)來(lái)看，應(yīng)使用___水來(lái)配制該培養(yǎng)基。進(jìn)行選擇培養(yǎng)的目的是____。

（2）鑒別培養(yǎng)與篩選：將選擇培養(yǎng)后的樣品涂布培養(yǎng)于起選擇或鑒別作用的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)得到單菌落，有些單菌落周圍出現(xiàn)較大的分解圈，有些單菌落雖然長(zhǎng)勢(shì)良好，但周圍不出現(xiàn)分解圈。后者菌落出現(xiàn)的原因是___________

（3）微生物長(zhǎng)勢(shì)的測(cè)定：微生物數(shù)目的測(cè)定可以使用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法和稀釋涂布平板法，兩種測(cè)定方法各有特點(diǎn)。與顯微鏡直接計(jì)數(shù)法相比，下列選項(xiàng)中屬于稀釋涂布平板法的特點(diǎn)是 ___（填序號(hào)）。

①操作簡(jiǎn)便快捷 ②操作復(fù)雜耗時(shí)長(zhǎng) ③測(cè)量活菌數(shù)準(zhǔn)確度高 ④測(cè)量總菌數(shù)準(zhǔn)確度較高

Answer 1

【答案】受原油污染的海水 原油 海（或與海水滲透壓相同的鹽） 增加吸油菌的濃度，以確保能夠從樣品中分離得到所需的吸油菌 這些菌落能夠產(chǎn)生分解原油的胞內(nèi)酶，且酶含量或活性較高 ②③

【解析】

欲篩選出能降解原油的菌株，培養(yǎng)基中應(yīng)只含有原油而無(wú)其它碳源，不能降解原油的細(xì)菌在此培養(yǎng)基上不能生存。分離純化菌種時(shí)，需采用的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法，使聚集在一起的細(xì)菌細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落。 降解原油能力越強(qiáng)的菌株，在菌落周圍形成的分解圈（透明圈）越大。

（1）欲篩選出能降解原油的菌株，從受原油污染的海水中采集樣品。在篩選高效降解原油的菌株過(guò)程中，應(yīng)將樣品稀釋液接種于以原油為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，從功能上講，該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。從培養(yǎng)基的理化性質(zhì)來(lái)看，應(yīng)使用海水來(lái)配制該培養(yǎng)基。進(jìn)行選擇培養(yǎng)的目的是，增加吸油菌的濃度，以確保能夠從樣品中分離得到所需的吸油菌。

（2）培養(yǎng)得到的單菌落中的細(xì)菌都是能降解原油的，如果細(xì)菌降解原油的酶在細(xì)胞外，則菌落周圍出現(xiàn)較大的分解圈。如果細(xì)菌降解原油的酶在細(xì)胞內(nèi)，且酶含量高，則單菌落周圍不出現(xiàn)分解圈。

（3）用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，操作復(fù)雜耗時(shí)長(zhǎng)，測(cè)量活菌數(shù)目準(zhǔn)確度較高。但是有些細(xì)菌靠在一起，形成一個(gè)菌落，這樣統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目少；顯微鏡直接計(jì)數(shù)法統(tǒng)計(jì)微生物數(shù)目時(shí)，操作簡(jiǎn)單，由于不能排除死細(xì)胞的數(shù)量，所以統(tǒng)計(jì)的數(shù)目往往偏高。用稀釋涂布平板法于顯微直接計(jì)數(shù)相比，特點(diǎn)是②③。