Question

（12分）科學家將魚抗凍蛋白基因轉入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高。下圖一是轉基因抗凍番茄培育過程的示意圖，圖二為質(zhì)粒限制酶酶切圖譜。魚的抗凍蛋白基因不含圖中限制酶識別序列，Ampr為抗氨芐青霉素基因，其中①—④是轉基因抗凍番茄培育過程中的相關步驟，Ⅰ、Ⅱ表示相關結構或細胞。請據(jù)圖作答：

（1）獲取魚的抗凍蛋白基因途徑主要有 。為了在番茄中獲得抗凍蛋白必須將抗凍蛋白基因連接在質(zhì)粒中的 之后 。圖中③、④依次表示組織培養(yǎng)過程中番茄組織細胞的 過程。

（2）在構建基因表達載體時，可用一種或者多種限制酶進行切割。該酶的特點 。在此實例中，應該選用限制酶 切割。

（3）要利用培養(yǎng)基篩選出已導入含魚的抗凍蛋白基因的番茄細胞，應使基因表達載體Ⅰ中含有 作為標記基因。

（4）研究人員通常采用 法將魚抗凍蛋白基因?qū)�入番茄細胞�?nèi)。通常采用 技術，在分子水平檢測目的基因是否翻譯形成了相應的蛋白質(zhì)。

Answer 1

（1）從體細胞中分離和化學方法人工合成 啟動子 脫分化、再分化

（2）識別特定的DNA序列并在特定位點切割 NdeⅠ、BamHⅠ

（3）抗氨芐青霉素基因(Ampr)

（4）農(nóng)桿菌轉化(或基因槍法等) 抗原-抗體

【解析】

試題分析：

（1）獲取目的基因的主要途徑有從體細胞中分離和化學方法人工合成；構建基因表達載體時，必須將目的基因插入啟動子之后；分析題圖可知，圖中③為脫分化過程，形成愈傷組織，④為再分化過程，形成胚狀體。

（2）限制酶的作用特點是能識別特定的DNA序列并在特定位點切割DNA分子；分析題圖可知，啟動子和終止子之間有三個限制酶位點：NdeⅠ、Xba I和BamHⅠ，其中質(zhì)粒中Xba I的酶切位點有兩個，會把終止子切掉，因此不能用Xba I進行切割，而NdeⅠ、BamHⅠ的位點都只有一個，因此最好用NdeⅠ、BamHⅠ兩種限制酶進行切割，可以防止目的基因插入時出現(xiàn)反向連接。

（3）分析題圖，圖中Ampr為抗氨芐青霉素基因，為標記基因，可以用于目的基因的檢測與鑒定。

（4）把目的基因?qū)�入植物細胞的方法最常用的是農(nóng)桿菌轉化法；檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)的方法是抗原-抗體雜交技術。

考點：本題考查基因工程的有關知識，意在考查考生識記能力、識圖能力和理解所學知識的要點，把握知識間的內(nèi)在聯(lián)系的能力；能運用所學知識與觀點，通過比較、分析與綜合等方法對某些生物學問題進行解釋、推理，做出合理的判斷或得出正確的結論。