Question

【題目】羊奶中乳白蛋白含量很低，科研人員嘗試利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)將人乳白蛋白基因?qū)�入羊胚胎的成纖維細胞核，進而培育轉(zhuǎn)基因克隆山羊。技術(shù)流程如下圖，據(jù)圖回答：

（1）圖中①過程中使用的酶有 。

（2）圖中②過程使用的方法是 。將導入成功的細胞核注入到③ 構(gòu)成重組細胞，培養(yǎng)成早期胚胎，經(jīng)圖中④ 技術(shù)可培育成轉(zhuǎn)基因克隆山羊。

（3）與預期結(jié)果相反，轉(zhuǎn)基因克隆山羊的乳汁中乳白蛋白含量依然很低。為探究其原因，研究人員從 細胞中提取總RNA，然后以 作為探針進行分子雜交，結(jié)果發(fā)現(xiàn)沒有出現(xiàn)雜交帶。

（4）研究人員對上述現(xiàn)象的解釋：可能由于人乳白蛋白基因 （首端、尾端）無啟動子，從而不能進行轉(zhuǎn)錄。推測要使該基因在山羊乳腺細胞中表達，須將它與 等調(diào)控組件重組起來，構(gòu)建基因表達載體。

Answer 1

【答案】（1）限制酶、DNA連接酶

（2）顯微注射技術(shù) 去核卵母細胞（必須體現(xiàn)出無核） 胚胎移植

（3）（轉(zhuǎn)基因克隆山羊）乳腺 同位素標記的含有人乳白蛋白基因的DNA片段

（4）首端 山羊乳腺蛋白基因的啟動子

【解析】

試題分析：（1）圖中①過程為構(gòu)建基因表達載體的過程，其中使用的酶有限制酶、DNA連接酶。

（2）圖中②過程表示將構(gòu)建的基因表達載體導入受體細胞（胎兒的成纖維細胞），常采用顯微注射技術(shù)。構(gòu)建重組細胞，需將成功導入人乳白蛋白基因的細胞核注入到去核的卵母細胞中。由重組細胞培養(yǎng)成的早期胚胎，需經(jīng)胚胎移植技術(shù)才能培育成轉(zhuǎn)基因克隆山羊。

（3）為探究轉(zhuǎn)基因克隆山羊的乳汁中乳白蛋白含量依然很低的原因，可從（轉(zhuǎn)基因克隆山羊）乳腺細胞中提取總RNA，然后以同位素標記的含有人乳白蛋白基因的DNA片段作為探針進行分子雜交。

（4）若進行分子雜交的結(jié)果沒有出現(xiàn)雜交帶，可能的原因是：人乳白蛋白基因首端無啟動子，從而不能進行轉(zhuǎn)錄。要使該基因在山羊乳腺細胞中表達，須將它與山羊乳腺蛋白基因的啟動子等調(diào)控組件重組起來，構(gòu)建基因表達載體。