Question

【題目】臨床實(shí)驗(yàn)表明，服用乳酸菌及其制品具有減少人體血清膽固醇含量、降低心腦血管發(fā)病率的功效。下面是從酸奶中篩選出高效降低膽固醇的乳酸菌的實(shí)驗(yàn)，請回答下列問題：

（1）甲、乙兩位同學(xué)為測定某一酸奶樣品中微生物的數(shù)量，在同一稀釋倍數(shù)下得到以下結(jié)果：

實(shí)驗(yàn)者	平板菌落數(shù)
	A	B	C	D
甲同學(xué)	110	140	149	133
乙同學(xué)	27	169	176	124

兩位同學(xué)的計(jì)數(shù)結(jié)果中，______同學(xué)的結(jié)果可信度低，其原因是_________________。

（2）為獲取純種乳酸菌，將少量酸奶制成梯度稀釋液，將其中稀釋到的稀釋液涂布于添加了碳酸鈣的乳酸菌培養(yǎng)基（MRS培養(yǎng)基）平板上，在_____（填“有氧”或“無氧”）條件下37℃恒溫培養(yǎng)72h。挑取有_______的菌落，用_______法接種在MRS斜面培養(yǎng)基上保藏備用。

（3）為獲得能高效降低膽固醇的乳酸菌菌株，在普通的MRS液體培養(yǎng)基中添加適量_________并用超聲波振蕩乳化20min，調(diào)pH至7.0，然后將斜面培養(yǎng)基上保藏的乳酸菌菌株接種到高膽固醇培養(yǎng)液中培養(yǎng)，一段時(shí)間后加入特定顯色劑，離心，用_____法測定上清液中膽固醇的含量，以_________________________作為對照，測定菌株降低膽固醇的能力，篩選出目的菌株。

Answer 1

【答案】乙 乙同學(xué)的結(jié)果中，有一個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另兩個(gè)相差懸殊，結(jié)果的重復(fù)性差 無氧 溶鈣圈（或透明圈） 劃線 高膽固醇 光電比色 未接種的高膽固醇培養(yǎng)液

【解析】

（1）利用稀釋涂布平板法對微生物計(jì)數(shù)，要注意稀釋倍數(shù)的選取，為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，通常選擇菌落數(shù)在30～300之間的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。（2）利用溶鈣圈法對乳酸菌進(jìn)行篩選的原理是乳酸菌產(chǎn)生的酸性物質(zhì)和CaCO3反應(yīng)而出現(xiàn)溶鈣圈。（3）通過實(shí)驗(yàn)獲得能高效降低膽固醇的乳酸菌菌株，自變量是加入高膽固醇的普通的MRS液體培養(yǎng)液中是否接種乳酸菌菌株，因變量是培養(yǎng)液中膽固醇的含量，可以采用光電比色法測定。

(1) 表中信息顯示：乙同學(xué)的結(jié)果中，有一個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另兩個(gè)相差懸殊，結(jié)果的重復(fù)性差，說明乙同學(xué)的結(jié)果可信度低。

(2) 乳酸菌屬于厭氧菌，因此需要在無氧條件下培養(yǎng)。乳酸菌產(chǎn)生的乳酸和MRS培養(yǎng)基中的CaCO3反應(yīng)而出現(xiàn)溶鈣圈�？梢姡瑸楂@取純種乳酸菌，應(yīng)挑取有溶鈣圈的菌落，而后將該菌落用平板劃線法接種在MRS斜面培養(yǎng)基上保藏備用。

(3) 為獲得能高效降低膽固醇的乳酸菌菌株，在普通的MRS液體培養(yǎng)基中應(yīng)添加適量的高膽固醇并用超聲波振蕩乳化20min，調(diào)pH至7.0，然后將斜面培養(yǎng)基上保藏的乳酸菌菌株接種到高膽固醇培養(yǎng)液中培養(yǎng)。一段時(shí)間后加入特定顯色劑，離心，用光電比色法測定上清液中膽固醇的含量，以未接種的高膽固醇培養(yǎng)液作為對照，測定菌株降膽固醇的能力，篩選出目的菌株。