Question

【題目】Rag2基因缺失小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細胞�？蒲腥藛T利用胚胎干細胞(ES細胞)對Rag2基因缺失小鼠進行基因治療。其技術(shù)流程如圖：

（1）步驟①中，在核移植前應(yīng)去除卵母細胞的________。小鼠體細胞體外培養(yǎng)時，所需氣體主要是O2和CO2，其中CO2的作用是維持培養(yǎng)液（基）的______________。

（2）步驟②中，重組胚胎培養(yǎng)到________期時，可從其內(nèi)細胞團分離出ES細胞。體外培養(yǎng)條件下，ES細胞在______________細胞上，能夠維持只增殖不分化的狀態(tài)。

（3）步驟③中，需要構(gòu)建含有Rag2基因的表達載體�？梢愿鶕�(jù)Rag2基因的__________設(shè)計引物，利用PCR技術(shù)擴增Rag2基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分別在片段兩側(cè)進行酶切獲得Rag2基因片段。為將該片段直接連接到表達載體，所選擇的表達載體上應(yīng)具有______________酶的酶切位點。

（4）為檢測Rag2基因的表達情況，可提取治療后小鼠骨髓細胞的________，用__________的抗體進行雜交實驗。

Answer 1

【答案】細胞核 PH值（或酸堿度） 囊胚 飼養(yǎng)層 核苷酸序列 HindⅢ和PstⅠ 蛋白質(zhì) 抗Rag2蛋白

【解析】

分析題圖：圖示是利用胚胎干細胞（ES細胞）對Rag2基因缺失小鼠進行基因治療的過程圖解，其中①表示核移植過程，②表示早期胚胎培養(yǎng)過程，③表示采用基因工程技術(shù)將目的基因?qū)�入受體細胞。

（1）核移植是指將體細胞核移植到去核卵母細胞中，因此①核移植過程中，在核移植前應(yīng)去除卵母細胞的細胞核；CO2的作用是維持培養(yǎng)液（基）的PH值。

（2）ES細胞可從囊胚期的內(nèi)細胞團中分離；體外培養(yǎng)時ES細胞在飼養(yǎng)層細胞上培養(yǎng)，可以維持只增殖不分化的狀態(tài)。

（3）設(shè)計引物要遵循堿基互補配對原則，所以根據(jù)Rag2基因的核苷酸序列進行設(shè)計；Rag2基因是利用限制酶HindⅢ和PstⅠ切割獲得的，所以表達載體應(yīng)具有HindⅢ和PstⅠ的酶切位點。

（4）基因表達的產(chǎn)物是蛋白質(zhì)，故為檢測Rag2基因的表達情況，需要提取小鼠骨髓細胞的蛋白質(zhì)與抗Rag2蛋白的抗體進行雜交。